细胞增殖的检测方法之ATP检测

细胞增殖指的是细胞物质准备和细胞分裂的相互连续过程，细胞增殖和细胞活性检测包含在一些公司提供的细胞实验服务中。一个完整的细胞周期包括分裂间期和分裂期，细胞周期是一个细胞的整个生命过程，细胞增殖的循环过程构成了一个细胞周期。生长因子、激素及癌基因产物等均可诱导细胞的增殖或抑制细胞的增殖，通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡而实现，因此对细胞增殖的研究可以观察和判断细胞所处的时期以及生长状况，并用于医药研究。

三磷酸腺苷（ATP）是一切生物体新陈代谢的能量源泉，普遍存在于一切生物细胞内，为细胞内的各种需能过程提供能量，是细胞生存的必须因素。在细胞内酶的作用下，ATP将很快被分解掉。细胞内的ATP含量受到严格的调控，死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。因此，检测ATP也可以得到细胞增殖的信息，可以广泛用于医药研发、食品卫生和环境检测等多个领域。细胞增殖和细胞活性检测包含在一些公司提供的细胞实验服务中。美迪西提供细胞实验服务，其生物部在分子生物学、细胞生物学、体外生物学和结构生物学领域有丰富广泛的经验，可以提供从最初的cDNA文库构建到药物设计，和通过蛋白质纯化、结构测定和分析测定的完整的一套生物学服务。

ATP检测可以用高压液相法、成色反应、荧光、化学发光或同位素等方法实现。然而高压液相法繁琐且昂贵，检测时间需要30min以上，且不能直接测定ATP的量，灵敏度仅为毫摩级。同位素方法虽然灵敏度高，但是污染大，而且需要严格的防护和废弃物处理过程，不适合大量使用。

1、ATP检测的生物化学发光法

目前应用最广的方法基于萤火虫荧光素酶反应系统特异地测定ATP的生物化学发光法，通过催化荧光素氧化，消耗ATP。如果有ATP存在，则荧光素就会发光，发光效率极高，发光量与ATP含量呈很好的线性关系，可以反映细胞内ATP的含量。生物发光法无需培养过程、操作简便、灵敏度高，在短时间内即可得到检测结果。然而由于此种方法以往由于荧光素和荧光素酶价格昂贵而难以普及，以最初是以荧光虫为原料提取荧光素酶的，其制备过程比较复杂，生产周期长，成本也较高。

2、ATP检测的ADP/ATP法

生物体内多种酶促反应以ATP为底物，消耗能量；ATP的高能磷酸键断裂，形成ADP或AMP。多种具有重要生物功能的酶如激酶、ATP酶等产生ADP，通过检测其酶促反应中ADP与ATP比值，可以间接监测酶促反应的进程。细胞在发生凋亡或坏死时，其ADP与ATP含量的变化特征不同，检测细胞中ADP与ATP比值，也是区分细胞凋亡或坏死的一个间接指标。还有一种ATP/ADP检测方法，在测定ATP含量的基础上，进一步将ADP转化为ATP，采用相同的ATP测定方法，对ADP含量进行定量，从而得到ADP与ATP比值。

3、基于ATP检测的淋巴细胞增殖活性分析试剂

研究者开发了一种基于ATP检测的淋巴细胞增殖活性分析试剂盒及其制备和应用，试剂盒的组成为：细胞培养液、单克隆抗体包被的CD4阳性选择免疫磁珠、洗涤缓冲液、裂解液、酶反应液和ATP标准应用液[1]。应用步骤如下：(1)分离纯化获得CD4细胞，将CD4细胞进行裂解，释放细胞内ATP；(2)将上述含ATP的样本与酶反应溶液混合，同时进行ATP标准品和样本的RLU测定，绘制标准品的ATP浓度-RLU值双对数曲线；(3)将样本的RLU值代入步骤(2)得到的标准曲线和公式，计算样本的ATP浓度值。研究者发明的试剂盒可实施高通量样本检测，灵敏度高，特异性好，检测结果稳定可靠。
[1]一种基于ATP检测的淋巴细胞增殖活性分析试剂盒及其制备和应用[J].