免疫组化再战

2019年1月14日, 星期一，晴
今天只是星期一，按照昨晚的既定目标，我今天要请人家帮我鉴定一下，星期六做的那批免疫组化结果是不是合格了？
可是今天到实验室之后，和我们同一个培养箱的心内科医生ZYY告诉我，她的细胞昨天好好的，今天就污染了，所以强烈要求今天把培养箱彻底清洗一遍。那么征求了泌尿外科ZB医生同意之后，我们俩一起把细胞培养箱清洗了。（这里要特别说明的是其他科医生，比较比如说泌尿外科医生及内科医生对我们的辛勤付出置若罔闻，表示非常的气愤。但是后来想想也就算了，毕竟也是为自己服务的。）
140细胞真的自溶了，不知道为为什么，我我放在六孔板里面的一个孔，本来是为了做那个平板克隆实验的，结果细胞全部溶解，我也拍了，照留作纪念。还有就是我单独培养的细胞培养液，里面十分污秽，什么乱七八糟的东西都有，问了厂家，各种搪塞。心塞～～
时间很快，一下子到中午了。午饭回来，我请教了中心实验室的老师WXT，她特意帮我看了免疫组化的情况，并指出这个指标染色不是很典型，所以我就更铁了心要重新做一遍！！（这里需要补充说明的是今天早上的那个免疫组化专用的显微镜坏了，没办法，只能到荧光显微镜那边去看，那边倒置显微镜，而且是新装的，就不敢乱用，所以请了WXT老师来帮忙，她真的很热心的！！）
根据文献的报道（各个文献有出入），我今天决定选用EDTA进行抗原修复，12点左右差不多烤片结束（吃完午饭回来）就可以开始准脱腊和水化，由于有了周六的实践经验，这次操作起来就特别流畅。当然有些关键步骤事先请教好，比如说这个EDTA修复，我可是专门请教了免疫组化的大神PY学长（他可能做了一千多张了吧，我猜的），那EDTA的修复跟柠檬酸确实不一样，柠檬酸是直接在水里面煮，而EDTA是隔水炖。先把水煮到70度，保温大概20分钟，然后高压锅盖紧，然后煮沸喷气三分钟左右，最后打开盖子，自然冷却到60度左右就可以接着后续操作了。那么一抗处理也有些细节，我之前是直接把一抗放在TBST里面，那是有点问题的，如果你想定回收，最好放在一抗稀释液里面，这也是今天学的东西。
在孵一抗的过程中，我去给校友送窗花了。那个心脏彩超室实在难找，只能说协和真是太大了。
那么到下午的时候，整形外科JY医生过来了（他也免疫组化高手），我请教了他，怎么知道这个蛋白的染色部位。后来让他帮我看了一下抗体说明书，说是在细胞核上（白纸黑字写着）。我又问，有什么修复抗原，他又指着白纸黑字跟我说是EDTA！！真的很搞笑，我之前是怎么看的说明书，怎么会全然不知呢，真的太惭愧！！还有就是在苏木素复染的时候，JY医生特意给我展示了一遍，那手法真的是非常娴熟。
今天的食管正常细胞已经到位咯。一方面由于培养箱出问题了，另一方面自己细胞培养的手法还不够娴熟，所以请博士同学PZP帮我暂时处理了，等她培养好了，并有保种就可以交给我继续处理了。下午厦门师弟WZG也把140，510寄过来了。不知道SZM同学的109，709能不能到位～～～
昨天传代的510今天状态不错，但还是有一些小点点，不过这和此前的密密麻麻的黑带不一样！！不知道是不是提高胎牛浓度的原因。
针对培养液里面很多渣渣，今天专门用滤膜过滤了血清（感谢FQL提供的滤膜），希望这次一定要好好的。