【实验指南】选择合适的ELISA试剂盒需要考虑哪些参数

如需选取新的ELISA试剂盒，首先需要仔细评估检测性能。重要参数包括灵敏度、动态范围以及精度，这些在多数的ELISA试剂盒都有报告。对于典型样品类型而言，其它参数对ELISA性能更具预测价值。回收率(%)及稀释线性测量实际样品中的靶蛋白，这些实际样品包括血浆、血清或细胞培养基。

本期内容旨在告诉您如何解读不同参数，以帮助您的样品找到最合适的 ELISA 试剂盒。

选择ELISA试剂盒时需要注意的参数汇总：

参数

验收标准

灵敏度取决于靶蛋白*

动态范围

批内精度 CV (%)≤ 10%

批间精度 CV (%) ≤ 15%

特异性检查与高度同源性蛋白的反应

回收率 (%)≥ 80%

稀释线性与未稀释样品差异达 20%

ELISA灵敏度

灵敏度是ELISA试剂盒抗体对可检测的最低蛋白水平。

ELISA动态范围

动态范围是检测可准确量化的靶蛋白高浓度到低浓度区间。

*了解样品中预计的靶蛋白水平非常重要，这可以帮助检查给定的 ELISA 试剂盒灵敏度及动态范围是否合适。如果样品靶蛋白浓度很高，可以对样品进行稀释，以确保原始信号在测定的动态范围之内。

当检测实验中有两个参数时，简单的用标准蛋白来测定浓度往往会不准确。因为这很可能无法反应出样本中内源蛋白的动态变化。

ELISA CV

CV(%)或变异系数代表了测定的一致性。

CV的计算主要是用于评估批间精度或板间一致性，以及批内精度或同一实验中重复测定结果的一致性。

––批间CV百分率小于15%通常是可以接受的。

––批内CV百分率应低于10%。

ELISA特异性

确保ELISA试剂盒使用的抗体不与非靶蛋白进行交叉反应，这点非常重要。这些可能是不同物种间的高同源性蛋白。

比如，人体因子 IX SimpleStep ELISA® 试剂盒(ab188393)特异于人体因子 IX 且不与小鼠、大鼠、兔子、山羊、豚鼠、仓鼠、牛、狗或猪样本发生反应。

ELISA回收率

回收率(%)是通过给一份生物样品类型（同时也称样品基质）里加入已知数量的纯化靶蛋白而确定的。对于分泌蛋白，比如细胞因子，常见的样品基质有血浆及血清；对于细胞内蛋白，比如激酶，样品是细胞培养裂解物。

测量ELISA中的加标样品，并通过标准曲线计算浓度。将计算的浓度与已知的蛋白浓度进行比较，以百分比的形式呈现。比如，100% 回收率表示观察浓度与样品里加标蛋白的实际浓度一致。这表明同一样品类型中的其它蛋白及分子并未干扰靶蛋白的量化。

如果对于某一特定样品类型，回收率测量值小于 80%，则需要选取另一套不同的 ELISA 试剂盒以供量化。

ELISA稀释线性

稀释线性与回收率彼此相辅相成，因为它主要测量了生物样品里的天然蛋白，而非加标蛋白。稀释线性是根据ELISA测量的已知阳性样品中的不同稀释度来确定的。靶蛋白浓度通过将稀释因子乘以计算所得浓度来确定。为获取最佳结果，所有稀释液的样品浓度都应保持一致。如果发现与未稀释样品的差异超过20%，则需要选取其它ELISA试剂盒来做精准定量。

备注：信息和图片来自Abcam资料及网络