上周,有同学问我“实验怎么样?”
我说“这里的山路十八弯,这里的水路九连环。”
说着说着,我自己就唱起来了。
来,一起唱啊!
今天说一说我这一个月以来养细胞的种种。
上学期用细胞A做实验,没做出理想的实验结果,原因大致有两个,暂时还不能确定是哪一个。
先换细胞B试一试。
8月25号,从兰州开会完回来,开始复苏细胞。
在冻存细胞的液氮罐里找细胞B,结果把液氮罐翻了个底朝天,也没找到一管细胞B,肯定是被之前的人用光了。
急着用,那就刷人品吧。
找博士班上的同学借了一皿细胞B。(后来去他们实验室了才发现同学的师妹是我们武大下一级的、在我之后也去过泉塘支教的、跟她是微信好友、她知道我长啥样但是我不知道她长啥样的化院直系小朱学妹)细胞状态挺好,长得很快。
可是8月末有其他事,疏于照顾细胞。结果它们就为所欲为放浪形骸无拘拘束地复制繁殖,等到把培养皿里面的营养消耗没了,还不见有人给它们传代和换液,就绝食以死相抗了。
忙完事情之后,我再来看它们,发现它们都死了。
不好意思再找同学借了。
细胞B没了,再看看上学期用的细胞A行不行吧。
液氮罐里还有冻存着的细胞A。
虽然细胞A没做出来实验结果,但以目前的证据并不能证明细胞A就一定不行。
于是想着用细胞A再试一遍,规范一下各方面的操作,看能不能做出比较好的实验现象出来。
复苏细胞A,第一天大部分都贴壁,看着还可以。
第二天换液之后,细胞陆陆续续都飘起来了,死了。
复苏失败。
不甘心。
再复苏一瓶,重复之前的现象。
再次复苏失败。
与此同时,购买细胞B。
由于之前在协和细胞中心买细胞周期太长,这次问了下实验室同学,被告知可以从武汉某生物公司购买细胞,费用贵三分之一,但直接打电话下单即可,比协和的流程简单不止一点点,且货期短,到货快。
于是在复苏第一管细胞A的同时,从生物公司订购了细胞B。
细胞B一个周就到货了。一同来的还有实验室另外一个同学的细胞C。
在烘箱里稳定3个小时之后,见细胞B差不多可以传代了,便1传2。
1传2的细胞密度很大,理论上不应该有什么问题。
第二天,细胞有一些贴壁了,有一些没有贴壁。
第三天,贴壁了的细胞慢慢地都飘起来了,贴壁的细胞越来越少。
第四天,活细胞数已经很少,可以宣告细胞养活失败的结论了。
实验室另外一个同学的细胞C情况更为严重,只是换了个液,第二天就死了。
我们断定是这家生物公司的细胞质量不好,跟公司反馈了情况之后,对方同意重发一次。
这时候,细胞B死了,又没有细胞用了。
从液氮罐里第三次取出一管冻存的细胞A,这次小心翼翼地复苏,什么环节都谨慎处理,希望能够复苏成功。
第二天希望的气球还在,第三天希望的泡沫破碎。
同前两次一样,先贴壁,然后飘起,最后都死了。
另外两个养细胞的同学从液氮罐里面取出的细胞也都复苏失败。
我稍感安慰,这至少证明不是我的操作问题。
但安慰感不到一会儿便被我还是没有细胞可用的现实给浇灭了。
此时,我无比英明神武地做出了一个决定,不再傻乎乎地等生物公司重发的那瓶细胞到货,而是下单从协和买。
我一共从协和买过三次细胞,第一次用了三四周,第二次用了两周,这一次,差不多一个周,那边的老师就通知去取细胞。
同一天到的,还有生物公司重发的那瓶。
然后我就有了两瓶细胞B。一瓶是从协和买的,一瓶是从生物公司买的。
这两瓶细胞长得都还不错,当天就得传代。
协和买来的细胞传代下来,长势很好。而从生物公司买来的细胞如第一次买的一样,传代之前状态还不错,传代之后第二天第三天就不行了,长不起来。
第一次从生物公司买来时传完代细胞就死了,我曾怀疑过是不是我传代技术或者所用胰酶的问题。
可是这次协和的和生物公司的细胞我是同批次传代的,前者细胞能长起来,后者就不行。
加上实验室同学从生物公司买来的那瓶细胞C也没养活,基本上可以排除我的操作技术和胰酶的问题,确定是生物公司细胞质量的问题。
好在从协和买回来的细胞长得很正常。
经过几天,传了两次,传到5瓶的时候,从协和买回时自带的培养基已经用完了。我把其中的4瓶冻存下来留着保种,剩下的1瓶接着传代以便后用。
剩下的这瓶细胞传代时,我用的是实验室自配的培养基(以下简称自己的培养基)。
冻存和传代时,我还留出了一些细胞。传了6个小皿,打算做实验用。(后来证明这一决定也是非常明智的)
结果第二天,发现传代后的2个大皿里面的细胞都死得差不多了。
心塞塞啊。
肯定是换成了自己的培养基,细胞不适应,都死了呗。
不报什么希望地、例行公事般地看看小皿。
因为一般情况是,在某一次操作下,大皿比小皿的细胞长得要好一些。
大皿的细胞都死了,小皿的还会活着吗?
唉,小皿的细胞还真的活着!
6个小皿里面的细胞状态很不错,死细胞很少。
这就很奇怪了,小皿也是用的自己的培养基啊,怎么就没死呢?
大皿与小皿的区别在于大皿用的是大概一个月前配的培养基,小皿用的是混合培养基(一半是一个月前配的培养基,一半是新配的培养基)。
因为一个月前配的培养基用完了,所以又新配了一瓶。
按之前的经验来看,一个月前配的培养基也应该没什么问题,在冰箱里放一个月不怎么会变质啊。
可是结果就是这么匪夷所思,大皿里的细胞死了,小皿里的细胞还活着。
我想凭借小皿里面的细胞打个翻身仗,看看能不能把它们养活。
我取消了本来要用小皿做的实验。因为一旦做了实验,小皿的细胞就不能用了。
就这么养着它,让它们长啊长。
中间换了一次液,换液之后,死了一些细胞,但大部分细胞还好。
看来细胞确实需要适应我们自己的培养液一段时间。
到了昨天,也就是换了培养液之后,洗去了漂浮着的死细胞。
我把其中的5个小皿里面的细胞都弄了下来,转移到一个大皿里面去。
留了1个小皿,便于追踪查看后续生长状况。
小皿底面积挺小的,我还担心5个小皿的细胞数太少,放到大皿里面去,细胞密度太低,养不活。
也担心娇气的细胞被转移到大皿之后,换了新环境,水土不服,绝食抗议,以死相争。
为了给它们一个舒适的生长环境,我还千年难得一次地把细胞间三个房间的地板用蒸馏水和75%的酒精擦洗了个干干净净。(其实是看不下去细胞间地板太脏心血来潮做了个卫生)
临走的时候,我看了细胞一眼。嗯,密度妥妥的够,可是都还悬浮着,它们能沉下去吗?
它们怎么还不沉下去贴壁啊?
我心里一点底都没有啊。
要是他们贴不了壁都死了,可怎么办啊?如果大皿和小皿的细胞都死了,我要从液氮罐里把冻存的4管细胞取出来1管复苏吗?
可是大皿里的细胞都没有适应自己的培养基。
复苏的细胞就能适应吗?
能适应的可能性很小吧?
我忐忑不安地离开了细胞间。
然而忐忑不安也只是一下下,我离开了细胞间之后,就把这事儿给忘到脑后了。
直到今天早上来了,我才想起来要去看它们一下。
没想到,它们乖乖地都贴壁了,只有极少的死细胞。
可能是感动于我昨天里里外外把细胞间三个屋子的地板擦洗得干干净净的辛苦,也可能是看不下去我这一个月以来养细胞的辛酸和不顺,也可能是它们自己不想折腾了,就想岁月静好现世安稳地复制繁殖一代又一代地活下去。
总之,它们现在的长势不错,看样子应该没问题了。
希望它们不要再死翘翘了。
希望下周二和下周三的细胞实验能够顺利。
希望这个课题的实验能够圆满。
希望能够按期毕业。
以上。