使用说明丨Kamiya艾美捷抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP染色试剂盒

Kamiya艾美捷抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP染色试剂盒原理：

K-ASSAY®TRAP染色试剂盒用于破骨细胞中抗酒石酸酸性磷酸酶的染色。骨量由成骨细胞活性和破骨细胞活性之间的平衡控制。碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶被用作成骨细胞和破骨细胞的标志物。仅供研究使用，不得用于诊断程序。。  

Kamiya艾美捷TRAP Staining Kit抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP染色试剂盒组件：

固定剂，10%福尔马林，中性缓冲液（试剂1）1瓶，60毫升

含酒石酸盐的缓冲液，50 mM，pH 5.0（试剂2）1瓶，50 mL

显色底物（试剂3）10瓶，3mg/瓶

试剂盒尺寸：足够的试剂用于染色10 x 96孔板。

注意事项：

1.开始测定前仔细阅读说明。

2.本套件仅供研究使用，不适用于人类或诊断用途。

3.非常小心地确保本产品的质量和可靠性。但是，有可能在

在某些情况下，由于高水平的干扰因素，可能会获得异常结果。

协议：

染色程序（96孔板）

1.取出培养基。用100μlPBS洗涤每个孔一次。

2.向每个孔中加入50μL固定剂（试剂1）并在室温下固定5分钟。

3.用250μldH2O洗涤每个孔3次。

4.用5ml含酒石酸盐的缓冲液（试剂2）溶解1小瓶显色底物（试剂3）。

5.每孔加入50μL显色底物。

6.在37°C孵育20至60分钟（只有破骨细胞染色）。

7.当获得最佳颜色条件时，用dH2O水洗涤。（过度孵化会导致降水。沉淀开始前停止反应。）

Kamiya艾美捷抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP染色试剂盒培养上清液中TRAP的定性观察：

1.用5ml含酒石酸盐的缓冲液（试剂2）溶解1小瓶显色底物（试剂3）。

2.将30μL/孔的培养上清液分配到96孔板中并加入170μL/孔的显色剂

上面制备的含底物/酒石酸盐的缓冲液。

3.在37℃孵育3小时。

4.在540nm处读取酶标仪。

Kamiya艾美捷抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP染色试剂盒文章发表：

Sherlock, Jonathan P., et al. "IL-23 induces spondyloarthropathy by acting on ROR-γt+ CD3+ CD4? CD8? entheseal resident T cells."Nature medicine18.7 (2012): 1069-1076.

Kim, Jinkoo, et al. "Erythropoietin mediated bone formation is regulated by mTOR signaling."Journal of cellular biochemistry113.(2012): 220-228.