elisa标准曲线怎么做_如何合理绘制ELISA标准曲线要点

如何合理绘制ELISA标准曲线要点

许多ELISA试剂盒检查都涉及到规范曲线的疑问，规范曲线做的好与坏会直接影响到试验的结果，乃至是到试验的胜败，那么终究怎么制造或制造规范曲线呢？

一、做规范曲线样品检查时有几个疑问需求留意

1、样品的浓度等目标是依据规范曲线计算出来的，所以首要要把做规范曲线看作是比做正式试验还要主要的一件事，不然后边的试验结果无从谈起。

2、设置规范曲线样品的规范浓度规模要有一个对比大的跨度，而且要能涵盖你所要检查试验样品的浓度，即样品的浓度要在规范曲线浓度规模之内，包含上限和下限。而对于呈S型的规范曲线，尽量要使试验样品的浓度在中心斜度zui陡段，即曲线简直成直线的规模内。

3、选用倍比稀释法制造规范曲线中的规范样品浓度，这么就能够确保规范样品的浓度不会出现较大的违背。

4、检查规范样品时，应按浓度递加次序进行，以削减高浓度对低浓度的影响，进步准确性。

5、规范曲线的样品数通常为7个点，但zui少要确保有5个点。

6、做出的规范曲线相数因试验请求不同而有所变动，但通常来说，相数Rzui少要大于0.98，对于有些试验，zui少要0.99乃至是0.999.

二、挑选啥方程去拟合

在S曲线的低浓度部分能够用乘幂方程很好的拟合，中低浓度部分能够用直线方程，中心部分可用对数方程，而中后段可用四参数。免疫检查时标准点(可所以倍比稀释的，也能够不是)浓度假设和相应的吸光度(OD)值假设能够出现直线当然是zui抱负的了，这时能够经过EXELL等利便的取得拟合曲线，进而推算出样品的浓度值。

对于ELISA试剂盒标准曲线的拟合办法，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反响中的曲线拟合，但都只合用于曲线的一部分，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中心一段，而Logistic曲线则对曲线的悉数都有较好的合用性。在一个长的区间内，Logistic应当都能拟合得较为抱负。假设用来定量，S形曲线的中心段(较陡处)是对比好的，而两真个平坦部分计算误差会大，有时乃至会很大。用于免疫检查的所谓“标准曲线”真实称为拟合曲线对比适宜。目前国际上zui盛行的免疫检查拟合办法是“四参数逻辑拟合”，用这种拟合办法通常能够对比准确的反映浓度和吸光度的曲线，从而进一步对比准确的取得样品中待测物质的浓度值。但咱们做免疫检查很少有时候能够有这么抱负的情况，标品浓度和相应OD值通常是"S"型的曲线，这时就不能用直线拟合的办法了，而对拟合办法进行挑选即是必要的了。纽带在于你的标准曲线做到了S形的哪一部分，你想检查的样品浓度在曲线的哪一部分。当然，假设用于定量，仍是在中心一段较好。但建模型是一回事，而用它来定量是另一回事。这些办法当然没有一种办法能够通用，但也都能够用。但并不是说它即是的。事实上不仅是ELISA，其它良多生物学反响都是S形曲线，也都能够用Logistic曲线拟合。