如何快速的获得miRNA的northern-blot阳性结果

这里仍然要做的实验是RNA的northern-blot，只不过实验的对象不再是mRNA或者tRNA，而是长度20nt左右的miRNA。考虑到长度偏短，各种miRNA在我们提取的total RNA中含量不一，为了快速的建立实验体系，我们必须保证实验样品中要检测的miRNA是确确实实存在的，而且含量丰富。这里我首先借助不同客户来源的相同种属样本（Rattus）的miRNA-seq测序结果，统计了三个客户各自测序样本中表达量在top10内的miRNA。并做了韦恩图：

三种来源的miRNA-seq高表达结果统计

从这三个客户样本的测序结果中可以发现，有3种miRNA在三个不同客户中同时高表达出现,选择一种在NCBI上查找序列信息，同时核对是否与测序序列一致。这里除了核对序列以外，还可以在NCBI官网上查到这一“高表达”miRNA的相关文献。感兴趣的可以直接查看。这里我选择的是miRNA-30a-5p。在NCBI的搜索栏输入：

之后点击Gene，会出来各个物种的选择：选择物种是人的（这里注意物种的区分，有时候不同物种同一miRNA序列一致）后出现下面的信息栏：

之后点击序列那一栏，会出现具体序列信息：

选择miR-30a-5p的序列

注意一个miRNA的前提一般都比较长，而且可能会剪切出不同的miRNA，这里需要注意进行区分,找到自己想要的miRNA序列。注意这里的序列为miRNA序列，直接取它的反向互补序列即为探针序列。