学习笔记-如何阅读质粒图谱

最近因为新冠肺，迟迟不能上班，在家闲着想着也要学习，就查找了和工作相关的-学些构建质粒，那么首先需要学习如何看质粒图，下面是这两天学习到的，总结的记录一下：

1. 复制起始位点Ori，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒），Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。

2.再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记：

Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。

tetr ：可以阻止四环素进入细胞。

camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。

neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。

hygr：使潮霉素β失活。

3. 看多克隆位点（MCS）：它具有多个限制内切酶的单一切点（质粒上只能有该内切酶的唯一酶切序列，不然就一刀好几段了），便于咱们要研究的基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选，最常见的是β-半乳糖苷酶的蓝白斑筛选系统。

4.再看外源DNA插入片段大小：质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。

5.是否含有表达系统元件，即启动子（promoter）－核糖体结合位点（RBS）－转录终止信号（AATAAA同时是poly A）。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。

6.看报告基因：主要是为了能迅速检查功能基因是否表达的阳性判断，表达成功的蛋白在小鼠体内分布位置。

7.看质粒图谱上的箭头：它代表DNA两条链（正义链和反义链），即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上。

上面这些只是表面，要想自己完全会构质粒的话还需要加深学习，问专业人士，接下来几天加油学习。