细胞裂解液成分及类型

1.     裂解液成分了解:

(1)大多有效成分都是去垢剂,那么去垢剂是什么呢?

去垢剂功能的关键是具有两亲结构。所有的去垢剂都具有亲水“头部”区域和疏水“尾部”区域这一特征,常用的阴离子去垢剂SDS结构如图:


这些结构特性使得去垢剂可以在水性介质中聚集。在足够高的浓度下,每个分子的极性亲水区域朝向极性溶质(水),而疏水区域聚集在一起,形成一个具有疏水核心的热力学稳定的胶束。去垢剂胶束的疏水核心区域与蛋白质的疏水表面结合,形成可溶性的蛋白质-去垢剂复合物。

去垢剂根据其亲水基团的不同分为:阴/阳离子去垢剂、非离子型两性去垢剂、两性去垢剂。

a 阴/阳离子型去垢剂:作用强烈,会更大程度的改变蛋白质的结构,更容易受到pH、离子强度和反离子的性质等因素影响;

b 非离子型去垢剂:作用温和,由于不分离蛋白质-蛋白质键,非离子型去垢剂使得蛋白质可以保留其天然的结构和功能,不易变形(疏水链长度较短的去垢剂更易引起蛋白质失活);

c 两性去垢剂:相对于离子型去垢剂其更少产生变性,相对于非离子型去垢剂,又可以更有效的破坏蛋白质-蛋白质键并减少聚集。

(2)配置裂解液都需要Tris缓冲液,又是什么呢?

a. Tris学名叫三羟甲基氨基甲烷,它和Tris-base是一个东西,1M的Tris溶液的pH值大约是10~11,即常说的Tris碱;

b. Tris-cl和Tris-HCl是一个东西,就是写法上有所不同,即常说的Tris酸;

c. Tris-HCl就是在Tris-base的溶液中加入适当量的盐酸,调成你所需要的PH值。


2.    常用裂解液种类:

(1)NP40 lysis buffer:

a. 主要成分50mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1% NP-40。

b. 概述:NP-40是一种很温和的非离子型去垢剂,1%浓度基本可以破坏掉细胞膜,而对核膜的破坏作用较弱,结合特定的缓冲液可以获得胞浆蛋白。与蛋白结合力强,用于防止物质分子疏水间相互作用,确保蛋白的充分溶解和结构稳定。

c. 用途:常规的Western、IP和co-IP和ELISA,本实验室是做核蛋白的,由于获取核蛋白需要裂解细胞核膜,因此本lab WB实验用1%NP40+0.1%SDS(可使蛋白变形),IP/pull down实验用1%NP40+超声(保留蛋白结构)。

(2)SDS lysis buffer:

a. 主要成分:50mM Tris (pH8.1),1% SDS

b. 概述:是一种比较强烈的细胞组织裂解液,可裂解核膜。在SDS-PAGE电泳中,SDS能使蛋白氢键和疏水键打开并结合蛋白分子,使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度电荷且远远超过蛋白分子原有电荷,从而掩盖蛋白间电荷差别,使得电泳迁移率只取决于分子大小这一因素。

c. 用途:用于常规Western、ChIP等


各种常用裂解液的比较推荐参考碧云天网页:https://www.beyotime.com/lysis-buffer.htm

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