荧光原位杂交技术攻略

 

1.荧光原位杂交概念

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一种非放射性原位杂交技术，同时也是一种新型的分子生物学与细胞遗传学相结合的技术。荧光原位杂交技术是利用荧光检测系统对DNA进行定性、定量或相对定位分析的技术，其基本原理是根据DNA序列的互补性，用已知的荧光素、生物素标记的核酸探针与待检测样本的DNA进行杂交，形成可检测的双链核酸杂交。

 

 

2.荧光原位杂交探针标记方法

荧光原位杂交探针的荧光标记有两种方法。间接标记法是用生物素标记DNA探针，直接标记法是将荧光素与探针核苷酸或磷酸戊糖骨架直接结合。直接标记法检测步骤简单，但灵敏度不如间接标记法，因为信号不能放大。

3.荧光原位杂交探针类型

（1）双链DNA探针， 目前应用广泛，简便易行，不易降解，一旦克隆成功，就可运用相同的扩增和标记程序获得大量的标记探针

（2）单链DNA（ssDNA）探针，稳定，更易于使用，更具特异性对RNase具有抗性，更好的组织渗透性，无自我杂交

（3）RNA探针（核糖体探针），更高的热稳定性，更好的组织穿透力，特异性更高，RNase的影响更小

（4）合成寡核苷酸，经济、稳定、特异性强，对RNase具有抗性，组织渗透性好，重现性好

4.荧光原位杂交技术优势

荧光原位杂交法具有其他杂交方法没有的优势：

（1）FISH是非放射性元素标记，更加安全；

（2）FISH的实验周期短，可同时检测多种序列；

（3）FISH技术因其多次免疫化学反应增强了杂交信号，灵敏度与放射性探针相当 。

5.荧光原位杂交应用

荧光原位杂交技术广泛应用于基因表达分析、染色体结构和数目异常检测、癌症的快速临床诊断、人类产前诊断等领域，有着非常重要的应用价值。

6.卡梅德生物能够为客户提供高质量的荧光原位杂交服务

卡梅德生物（KMD Bioscience）致力于细胞生物学研究多年，拥有经验丰富的荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术服务人才，搭建了完备的FISH技术服务平台，我们能够提供包括从探针设计、样本处理、杂交检测、基因表达研究到数据分析等一站式FISH技术服务，拥有规范和标准的检测程序，从而保证实验结果的准确性，降低了假阳性和假阴性。卡梅德生物同时可定制合成多种类探针，包括大部分植物、动物、微生物，定制的探针大于150kb，特异性强，出错率低；利用荧光原位杂交技术，卡梅德生物还可以提供单克隆源性鉴定服务。

 

 

7.荧光原位杂服务交流程介绍

卡梅德生物可以提供荧光原位杂交服务，主要技术流程如下：探针设计与合成，样本处理，原位杂交实验，成像拍照，结果分析与项目报告。

7.1探针设计和合成

7.1.1即用型探针可以直接杂交，非即用型探针需要与与杂交液按 1：1：1：50 比例稀释，85℃变性 3 分钟，37℃平衡 5 分钟。

7.2样本处理

7.2.1脱蜡复水，将石蜡切片浸入二甲苯中脱蜡，2 次，每次 10 分钟；

7.2.2片子依次过 100%、85%、75%乙醇，各 3 分钟，PBS 3 分钟；

7.2.3 片子加胃蛋白酶消化液，37℃消化 15-30 分钟，PBS 洗涤 2 次，每次 3 分钟；

7.2.4预杂交：提前 30 分钟从冰箱中取出杂交液恢复至室温，滴加杂交液，杂交 仪中 55℃孵育 1 小时。

7.3原位杂交实验

7.3.1取出预杂交好的片子，去除多余液体，将探针滴加于片子上，完全覆盖组织， 放于杂交仪中 37℃杂交过夜；  

7.3.2片子入 2×SSC（0.1％NP-40）中洗涤 3 次，每次 5 min；

7.3.3 滴加 20ul DAPI-Antifade Solution 盖玻片封片，避光孵育 20min。

7.4成像拍照

卡梅德生物不同样本荧光原位杂交实验结果拍照：

 

7.5结果分析与项目报告

卡梅德生物交付：剩余的探针、切片以及样品，原始杂交显色成像照片，详细的实验报告（包含完整的实验流程及结果分析）。

卡梅德生物的技术专家将提供专业的一对一的定制化方案以及不同种属样本的检测，从探针设计、染色体/细胞/细菌制备/培养到结果呈现的全套定制荧光原位杂交（FISH）服务，交付完整的实验报告和拍照图片。