悬浮细胞小核酸转染特点

产品特点

◎卓越的悬浮细胞转染性能：细胞转染阳性率一般在75%以上，基因敲除效率在80%以上；

◎极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；

◎转染细胞范围广，绝大多数悬浮细胞都能获得比较理想的转染结果。

产品介绍

RFectSP悬浮细胞小核酸转染试剂是我公司研发团队在RFectPM原代细胞小核酸转染试剂的基础上加以改进研发成功的专门用于悬浮细胞小核酸转染的试剂。RFectSP可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA，可转染绝大多数悬浮细胞。目前，无论国外还是国内，悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的悬浮细胞小核酸转染试剂。RFectSP能够高效转染绝大多数悬浮细胞，获得比较理想的基因敲除效果。对于大多数悬浮细胞，RFectSP的细胞转染阳性率都在75%以上，而转染细胞死亡率不到10%。RFectSP的使用也极其简便，先将sRNA与RFectSP室温混合，再将siRNA-RFectSP混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。有关RFectSP悬浮细胞小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT覆盖国际上多个国家和地区。

操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔500 μl培养基，使细胞在转染时密度在30-50%，尽量不要使用抗生素。

B. siRNA-RFectSP混合物准备：

1. 6pmol siRNA 用50μl无血清培养基稀释。

2. 2μl RFectSP用50μl无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min。注意：确保在25 min内执行第三步操作，不要过于延迟。

3. 孵育5min后，将siRNA 稀释液与RFectMN稀释液混合（总体积100μl）。轻轻混匀，室温孵育20 min。

C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：

1. 将100μl混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5ml培养的细胞。轻轻晃动培养板5min，混匀。

2. 37°C培养48-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、

所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。

转染实验优化: 为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24孔培养板，调整 siRNA与RFectSP试剂的用量。siRNA用量在6-60 pmol (final concentration 10- 100 nM)之间调整，RFectSP试剂用量在1.0 - 3.0μl之间调整。

转染实验要点

l 转染过程尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加；

l 首次实验siRNA的用量设置在终浓度10nM、30nM、50nM、100 nM进行摸索 ，后续实验根据实验结果修改。