2021-03-26 QC1.0基于缺失率的过滤

https://blog.csdn.net/qq_40605470/article/details/113183901
虽然我的起始文件是vcf不是bfile,但是转换了格式就都一样

目前我的目录里是这些

[lyc@200server ~]$ ls
eee.log    plink                             prettify  rice.nosex
eee.map    plink2                            rice.bed  Rice.recode.vcf
eee.nosex  plink2_linux_x86_64_20210302.zip  rice.bim  test
eee.ped    plink2.log                        rice.fam
LICENSE    plink_linux_x86_64_20201019.zip   rice.log

文本plink数据包含两个文件:

包含有关个体及其基因型的信息(.ped);
包含有关遗传标记的信息(.map)
二进制plink数据由三个文件组成:

包含单个标识符(ID)和基因型(.bed)
包含有关个体(.fam)
遗传标记(.bim)

map

[lyc@200server ~]$ head -n 5 eee.map
1   Chr1_1203_T_C   0   1203
1   Chr1_1249_A_C   0   1249
1   Chr1_1266_G_A   0   1266
1   Chr1_1277_T_C   0   1277
1   Chr1_1325_C_T   0   1325

ped

[lyc@200server ~]$ head -n 5 eee.ped
PB-362 PB-362 0 0 0 -9 C C C C A A C C 0 0 0 0 G G G G C C A A T T T T T T A A A A T T T T A A A A T T A A G G G G G G T T C C A A T T C C G G T T T T T T 
[lyc@200server ~]$ wc -l eee.map eee.ped
   7186300 eee.map

       141 eee.ped
   7186441 总用量

可以看出共有141个基因型个体,共有7186300个SNP数据。

如果每次都不知道plink的命令

bash: plink: 未找到命令...
相似命令是: 'link'

plink前面加上./就行,好像加地址也可以

我想要查看个体缺失的位点数,每个SNP缺失的个体数
发现bfile的用法,也就是只用前缀名称的意思

(--bfile expects a filename *prefix*;
'.bed', '.bim', and '.fam' are automatically appended.)
[lyc@200server ~]$ ./plink --bfile rice --allow-extra-chr --missing
PLINK v1.90b6.21 64-bit (19 Oct 2020)          www.cog-genomics.org/plink/1.9/
(C) 2005-2020 Shaun Purcell, Christopher Chang   GNU General Public License v3
Logging to plink.log.
Options in effect:
  --allow-extra-chr
  --bfile rice
  --missing

773821 MB RAM detected; reserving 386910 MB for main workspace.
7186300 variants loaded from .bim file.
141 people (0 males, 0 females, 141 ambiguous) loaded from .fam.
Ambiguous sex IDs written to plink.nosex .
Using 1 thread (no multithreaded calculations invoked).
Before main variant filters, 141 founders and 0 confounders present.
Calculating allele frequencies... done.
Total genotyping rate is 0.878065.
--missing: Sample missing data report written to plink.imiss, and variant-based
missing data report written to plink.lmiss.

大概意思就是说141个体,无性别(本来就是水稻)plink.nosex 写的是不清楚的性别ID,总的基因型频率是0.878065,样本缺失数据报告被写入plink.imiss,基于变异的数据缺失报告写入plink.lmiss
所以我现在文件是

eee.log    plink2_linux_x86_64_20210302.zip  plink-temporary.bed  rice.log
eee.map    plink2.log                        plink-temporary.bim  rice.nosex
eee.nosex  plink.imiss                       plink-temporary.fam  Rice.recode.vcf
eee.ped    plink_linux_x86_64_20201019.zip   prettify             test
LICENSE    plink.lmiss                       rice.bed
plink      plink.log                         rice.bim
plink2     plink.nosex                       rice.fam

输出plink.imiss和 plink.lmiss两个文件。

plink.imiss:个体缺失位点的统计
plink.lmiss:单个SNP缺失的个体数

个体缺失位点统计

第一列为家系ID,第二列为个体ID,第三列是否表型缺失,第四列是缺失的SNP个数,第五列总SNP个数,第六列缺失率

[lyc@200server ~]$ head -n 10 plink.imiss
     FID      IID MISS_PHENO   N_MISS   N_GENO   F_MISS
  PB-362   PB-362          Y   759143  7186300   0.1056
  PB-363   PB-363          Y   889516  7186300   0.1238
  PB-364   PB-364          Y   840674  7186300    0.117
  PB-365   PB-365          Y   859383  7186300   0.1196
  PB-366   PB-366          Y   745249  7186300   0.1037
  PB-367   PB-367          Y   968356  7186300   0.1348
  PB-368   PB-368          Y   936545  7186300   0.1303
  PB-369   PB-369          Y   869221  7186300    0.121
  PB-370   PB-370          Y   806860  7186300   0.1123
SNP缺失的个体数

第一列为染色体,第二列为SNP名称,第三列为缺失个数,第四列为总个数,第五列为缺失率。

[lyc@200server ~]$ head -n 10 plink.lmiss
 CHR                SNP   N_MISS   N_GENO   F_MISS
   1      Chr1_1203_T_C        0      141        0
   1      Chr1_1249_A_C        0      141        0
   1      Chr1_1266_G_A        4      141  0.02837
   1      Chr1_1277_T_C        6      141  0.04255
   1      Chr1_1325_C_T       17      141   0.1206
   1      Chr1_1335_G_T       17      141   0.1206
   1      Chr1_1362_G_A        1      141 0.007092
   1      Chr1_1411_A_G        0      141        0
   1      Chr1_1482_T_C        0      141        0

好吧,缺失结果可视化我没搞出来

(题外话有空可以看看王健康老师写的基因定位与育种设计)

在“每个被试”基础上实施QC,后在“每个SNP”基础上进行QC,以最大限度地提高研究中剩余的SNP数。这种方法可防止由于小部分基因分型差的个体而错误地去除某个SNP,但是可能会由于小部分基因分型差的SNP而错误地去除一些个体。

https://www.jianshu.com/p/382a1967cc35
所以说要先搞个体再搞SNP

http://blog.sina.com.cn/s/blog_bcc268080102xdmy.html

1、单个样本的质量控制
(1)样本检出率(sample call rate):是指对于某个样本而言,通过测序并成功判型的SNPs与所有检出的SNPs的比值,通常的标准应当在80%或90%以上。
(2)杂合性程度(heterozygosity):这个参数过高即被排除,因为过高的杂合说明样本可能被污染,从而导致杂合基因型数目不相称,通常标准应该控制在23%-30%之间。
2、单核苷酸多态性的质量控制
(1)SNP检出率(SNP call rate):指对于某一个SNP位点,被成功检测到的样本与所有样本的比值,一般要求在90%以上。
(2)较小等位基因频率(minor allele frequency, MAF):对于那些MAF较小的SNPs,能得到的信息量较少,而且目前GWAS对这些SNP的检出效能也不高,通常要求MAF在3%以上。
(3)哈代-温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium, HWE)检出,HWE有助于确定那些有明显基因分型错误的SNPs,因此一般要求位点SNP的等位基因频率符合哈代-温伯格平衡。

我在文献中看到说SNP的缺失的过滤,应该先于个体的缺失的过滤,相反的程序可能会导致不必要个体的缺失

❝ 无论是测序还是芯片,得到的基因型数据要进行质控,而对缺失数据进行筛选,可以去掉低质量的数据。如果一个个体,共有50万SNP数据,发现20%的SNP数据(10万)都缺失,那这个个体我们认为质量不合格,如果加入分析中可能会对结果产生负面的影响,所以我们可以把它删除。同样的道理,如果某个SNP,在500个样本中,缺失率为20%(即该SNP在100个个体中都没有分型结果),我们也可以认为该SNP质量较差,将去删除。当然,这里的20%是过滤标准,可以改变质控标准。下文中的质控标准是2%。

https://blog.csdn.net/weixin_35698867/article/details/112482182这句话就很清楚明了

弄的这一大套东西或许都是一篇文献里的内容,但是英语太差就只能瞎搜搜
A tutorial on conducting genome‐ wide association studies:Quality control and statistical analysis

如果我需要在服务器上连网

su root
输入密码
然后vpn-connect
exit退回自己的账户就可以用了

https://www.jianshu.com/p/8340055d3646?utm_campaign=haruki思路来源
我觉得还是得可视化一下缺失结果,这样能更好的确定阈值选取多少,然后我就打算去摸索这个hist_miss.R的脚本
打不开https://github.com/MareesAT/GWA_tutorial
于是直接上代码

git clone https://github.com/MareesAT/GWA_tutorial.git

然后拥有了
GWA_tutorial

[lyc@200server ~]$ cp /home/lyc/GWA_tutorial/1_QC_GWAS.zip /home/lyc  

用这个把a文件复制到b目录下
然后解压缩

[lyc@200server ~]$ unzip 1_QC_GWAS.zip

然后发下还是不能用那个脚本


image.png

image.png
cp /home/lyc/1_QC_GWAS/hist_miss.R /home/lyc

这回应该可以了

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