日志

200902

pcr扩增不出来目的片段，调整：降低样品浓度，增加样品溶解度，降低样品input量

不规范操作：摸索条件时同时改动多个参数，没有阳性对照和阴性对照

教训：摸索条件时，每次只改一个参数，其余参数保持完全一致；好的阳性对照和阴性对照才能得出准确的结果

200903

pcr反应，input 10ug无法扩出目的条带，稀释后input500ng可以扩出目的条带，找原因

不规范操作：在摸条件的时候，不要用正式样品，更不要自己觉得这次肯定出结果就all in！！！
不符合预期现象：用试剂盒回收基因组DNA，input 100+ug，output 30ug。（1）试剂盒的滤柱回收上限为30~40ug；（2）样品加入酒精后出现沉淀，全部加到了一个滤柱内；（3）没有加前面步骤的buffer，可能影响滤膜的活化吸附力

不符合规范的操作：扩增文库时，pcr cycyles过高，会导致不同扩增难度的产物出现bias，所以要增加引物多样性，降低cycles

200908

不规范操作：出问题时，不要all in，要暂停实验，复盘整个实验的体系操作细节，然后网上查找原因，并请求高年级师兄姐的帮助。针对可能的问题，制定相应的解决方案。