刚买的细胞，收到后怎么处理？-迪医明生物

实验室杀手们，先别着急处理细胞，花5分钟仔细阅读~

1、对于复苏细胞

① 请按照说明书提前准备好基础培养基、血清、因子、胰酶、双抗，不要随意更改培养条件，提前将生物安全柜进行酒精消毒和紫外灭菌。

② 收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液、培养基浑浊或污染，请拍照后及时联系我们。

③ 细胞在37℃培养箱中静置2-3小时，在倒置显微镜下确认细胞状态，给细胞（100倍×2张，200倍×2张）以及培养瓶（外观×1张）拍照留存，售后时肯定需要提供。

④ 瓶内充液培养基（运输培养基）不能再用来培养细胞，需按照说明书上的培养条件配制新鲜完全培养基培养细胞。

⑤ 镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，收集全部充液培养基，250g离心5分钟，弃去培养瓶中充液培养基，用新鲜配制的完全培养基重悬未贴壁的细胞，将细胞铺瓶至新的T25细胞培养瓶，补齐完全培养基至6mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，立刻对细胞进行传代处理。

注：在快递运送过程中细胞因振动会造成脱落现象，不论继续培养还是传代，未贴壁的细胞均需离心回收。

⑥ 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 ，保种1支，另外1支传代至T25新瓶，前3代建议均采用1:2传代，若细胞明显达到对数期，1:2传代后第二天就长满，则可提高传代比例，采用1:3传代，前面代次建议代代保种，以妨出现问题后无种可用。

⑦ 由于细胞在运输过程中失去原有适宜的生长条件且长时间颠簸，收到细胞进行传代后，建议前3-5代培养条件可适当提高血清含量以促进恢复细胞原有状态并缩短到达对数期的时间。

⑧ 市面上血清鱼龙混杂，假血清（BSA或替代物冒充血清）、劣质血清（小牛冒充胎牛）、水货（国产冒充进口）屡见不鲜，若客户培养细胞过程中明显感觉细胞生长速度不及预期，且无法更换血清，建议酌情提高血清含量来弥补血清质量的缺陷，以期提高细胞生长速度。

⑨实验结束后，将台子内的细胞放回培养箱，试剂放回冰箱，最后喷洒Deeming实验室安全卫士，预防微生物污染，关闭生物安全柜，打开紫外灭菌30分钟以上。

实验室安全卫士

特别提醒：

1.复苏的细胞千万千万别放冰箱，冷冻冷藏都不可以，这是活细胞，不是试剂，切记！！！

2.由于大部分的细胞系比较容易培养，以致于”问题血清“不能被及时发觉，但部分细胞对于血清品质有严格要求，用“问题血清“培养细胞极易造成细胞脱落、死亡，务必要擦亮眼睛，选择靠谱的血清供应商。

2、对于冻存细胞

① 收到快递后，若发现冻存管破损、箱内已无干冰，请拍照后及时联系供货商。

② 收到细胞后请尽快复苏，给冻存管（外观×1张）拍照留存，隔天在倒置显微镜下确认细胞状态，给细胞（100倍×2张，200倍×2张）拍照，售后时需提供。

③ 复苏细胞时不可直接将冻存管丢进水浴锅，用镊子夹住冻存管顶部，将冻存管下部浸入水中即可，由于水浴锅处于实验室暴露、高温、湿润环境，极易滋生各种微生物，建议在水浴锅中加入Deeming水浴锅安全卫士抑制各类微生物的滋生，最大程度上防止水浴锅中的微生物对冻存细胞造成的污染。

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④ 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作，冻存管、试剂、耗材拿进去之前一定要用75%酒精消毒，培养试剂尽量不要共用，若有共用试剂，建议配成完培后整体过滤除菌。

⑤ 原代细胞传代建议T25培养瓶1:2传代 ，保种1支，另外1支传代至T25新瓶，前面代次建议代代保种，以妨出现问题后无种可用，原代细胞需根据生长状况判断传代比例。

⑥ 第一次传代时需要摸索消化时间，建议每隔30s就观察一次，并记录消化时间，细胞会随着后期传代次数的增多而延长消化时间。

⑦ 由于细胞在运输过程中失去原有适宜的生长条件且长时间颠簸，收到细胞进行复苏后，前1-2代培养可适当提高血清含量以促进恢复细胞原有状态并缩短到达对数期的时间。

⑧ 原代细胞建议选用厂家供应的专用培养基，否则可能会因为改变培养条件，大大缩短细胞的培养代数，造成种子细胞的浪费。

⑨ 及时更换和补充培养箱水盘内的水，建议加入Deeming细胞培养箱水盘安全卫士进行污染物的预防。

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⑩ 购买的细胞只可用于科研，不得应用于人体（之前有宝子买MSC想用来喝或者回输，据说看了营销号说可以强身健体，这个绝对不可以昂，应用人体的细胞属于药物，需要进行人体使用的临床验证，请大家一定理性看待，勿信传言）。