操作步骤:
(请根据需要自备异丙醇、乙醇、100mL 离心管、50mL 离心管、20mL 离心管或 15mL 离心管)
1. 取出洗涤液 A 和洗涤液 B，按终浓度 70%比例加入无水乙醇，如每 3mL 洗涤液 A 和洗涤液 B 各加入 7mL 无水乙醇，充分混匀。
2. 取 50mL 菌液，置于 100mL 离心管中，4000rpm 离心 5 min，彻底弃除上清。
3. 加入 10ml 溶液 A，充分振荡 2 分钟，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在，转移到 15mL 离心管。4000rpm 离心 5min，彻底弃除上清。
4. 加入 2ml 溶液 I 和 100ul 溶液 B，充分振荡 2 分钟，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。
5. 加入 4ml 溶液 II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀 6 次，注意整个管子的内表面均需与溶液 II 接触，室温放置至溶液清亮。（一般为 4-5min，
如 5min 后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合。溶液 II 取液后应尽快旋紧管盖。）
6. 加入 3ml 溶液 III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀 8 次，4℃放置 5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）
7. 4℃、10,000xg 离心 15min，小心吸出上清，轻移至新的 15ml 离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）
8. 加入 3ml 异丙醇，充分混匀。将吸附柱放置于 15mL 配套收集管中，吸取 6mL 上述溶液加入吸附柱中，10,000xg 离心 1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回 15mL 配套收集管中，吸取剩余上述溶液加入吸附柱中，10,000xg 离心 1 分钟，弃收集管内废液。
10. 将吸附柱放回收集管内，加 3mL 洗涤液 A 至吸附柱内，静置 2min，10,000xg 离心 1min，弃收集管内废液。
11. 将吸附柱放回收集管内，加 2mL 洗涤液 B 至吸附柱内，10,000xg 离心 1min，弃收集管内废液。
12. 将吸附柱放回收集管内，加 1mL 无水乙醇至吸附柱内，静置 2min ，10,000xg 离心 1min，弃收集管内废液。同时，按每份提取样本 40μL 取洗脱液，放置于 1.5mL 灭菌离心管中，65℃预热（如提取 10 份菌液，即取 4000 μL 洗脱液预热）。
13. 将吸附柱放回收集管内，10,000xg 离心 2min，离去残留的洗涤液。开盖，室温放置 3 分钟。
14. 取出吸附柱，放入新的 15 mL 离心管，向吸附柱膜中间加入 40 μL 预热洗脱液，静置 1min，10,000xg 离心 2min，收集质粒 DNA 溶液。
注意事项：
1、 单只 BIOG 吸附柱质粒负载量在 150ug 左右，提取的菌液量应根据所含质粒量进行选择，如预估 1mL 菌液可提质粒 2ug，则单次提取所
取菌液不要超过 75mL，如菌液较多，可分 2 管或多管进行。
2、溶液 II 含碱性物质，洗涤液 A 含内毒素清除因子，取液完成后应立即旋紧管盖，密封保存。
3、提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 如所提质粒为低拷贝质粒或者大于 10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加溶液 I、溶液 B、溶液 II、溶液 III、异丙醇等的用量。
4、所用洗脱液的最小体积为 30 μL，可根据所提质粒的预估量和期望达到的质粒浓度选择合适的洗脱液用量，如预估提取的质粒量为 80ug，期望的质粒浓度为 2ug/uL，则选择 40μL 洗脱液进行洗脱。