科研汪的日常 02 有序

进入实验室的第一天，跟着师姐学习Real-time PCR实验，来检测目的基因在实验样本中的含量。

由于PCR仪一次能跑96个孔，故每次准备样本4对，6个目的基因的引物。

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看着师姐在EP管上详细地标注样本编号，实验日期等相关信息，然后细致地将八联管按1-8的方向摆放，连盖子都讲究没有标记的放在左端，有些不以为然，明明已经做好标记为什么还要这么强迫症似的讲究摆放方向？

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等到自己动手操作时，由于专注于加样，没能及时在盖子上做好标记，完成加样后一个不小心碰翻了手里的试管架，所有的样品管混到一起无法辨认，这才理解了师姐的用意：样品多，实验步骤繁杂琐碎，按固定的顺序可以避免突发情况。

小贴士：、

1. Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

2. 完成PCR扩增后，得到的数据一般通过2(-Delta Delta C(T))方法进行数据分析，得到目的基因的在样本中的表达情况。

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参考链接：

1. Real-time PCR

https://baike.baidu.com/item/%E5%AE%9E%E6%97%B6%E8%8D%A7%E5%85%89%E5%AE%9A%E9%87%8FPCR/5395897?fr=aladdin

2. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11846609/