原代细胞转染的方法

A.细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔500 μl培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50%。

B. siRNA-RFectPM混合物准备：

1. 6pmol siRNA用50μl无血清培养基稀释。

2. 2μl RFectPM用50μl无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min。注意：确保在25 min内执行第三步操作，不要过于延迟。

3. 孵育5min后，将siRNA 稀释液与RFectPM稀释液混合（总体积100μl）。轻轻混匀，室温孵育20 min。

C.将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：

1. 将100μl混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5ml培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。

2. 37°C培养18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、

所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。