WB的提组织蛋白及制胶板防漏水技巧，你都会了吗？

2019年1月30号，星期三，天气晴
我今天一口气提了5对组织样本的蛋白（分别是77a-c、91a-c、93a-c、96a-c、99a-c），并做了蛋白浓度测定，都合格了，下午也做了5X SDS缓冲液处理，并配了胶，明天就可以跑胶了。（预计十个组织和5个细胞）

说到配胶，我有一点技巧今天用了三次，感觉效果不错。这个技巧其实也没什么了不起的。就是把封口膜贴在制胶板下面，然后压实贴牢。其中一块板，我直接装水观察了10分钟，一点儿都没有漏！！！

〈提组织蛋白心得〉
取一块组织（约25mg）加入研钵，然后加入50mlPBS以助于研磨，研磨差不多后才加入200ul的PIPA裂解液（含PMSF）冲洗研钵，并转移至离心管，充分混匀。此后，每隔10分钟左右，震荡一下，有助于PIPA裂解液充分接触和裂解蛋白。30分钟后，在4℃，14000rpm，15分钟，取上清。【说明：1g组织可用80mlRIPA裂解液，1：80。】

今天再次接触流式细胞仪，这次操作比上次轻松自如多了，基本上都能用下来。具体的分析还有待提高。

还有，发现昨天传代的9706细胞状态不错，可能和细胞培养液有关——我把它调整为细胞说明书建议的DMEM。同样，对140也处理了，一个是F12，一个是DMEM。明天看看效果。【体会：有时候细胞状态差的话会分析小点点，这单单提高胎牛的比例或增加双抗的用量都是无济于事的。】