漱口水DNA是如何提取的?

操作步骤

1. 请自行准备:无水乙醇、异丙醇、灭菌 1.5mL 离心管。

2. 取出洗涤液,按终浓度 70%的比例加入无水乙醇,如 3mL 加入 7mL 无水乙醇,充分混匀后使用。

3. 取漱口水 1mL 至 1.5mL 于 1.5mL 离心管中,12,000 rpm 离心 5 min,弃上清,剩余 100μL 上清,充分振荡混匀 15 秒。

4. 分别加入 4μLDNACarrier、150μL 裂解液和 20μL 消化液,振荡混匀,65℃水浴 10 分钟。

5. 加入 500μL 异丙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响 DNA 的提取与后续实验。

6. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液;

7. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液至吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心 2 min,离去残留的洗涤液。在此期间,按每份样本 30μL 取洗脱液(如 10 份提取样本,即取300μL 洗脱液),放置于灭菌 1.5mL 离心管,65℃预热

9. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 离心管内,加入 30 μL 上述预热的洗脱液,静置 3 min,12,000 rpm 离心 2 min,收集 DNA 溶液。提取的DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项:

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。

2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于 37℃水浴中溶解即可。

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