【应用笔记】-菌落计数知多少(二)——计数和培养步骤

 在之前的文章里，分享了“菌落计数”国家标准的制定和演变。要严谨地实现计数操作，需要按照规范的步骤来进行。今天，我们就来了解菌落计数的具体步骤吧。

样品的稀释样品的均质

固体和半固体样品

    称取25 g置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。

液体样品

以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

    上步完成后，用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

移液过程使用的器具，都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪，核查洗耳球无菌程度，避免移液枪触及均质袋或试管内壁……

样品匀液完成后，可按相同操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。

    根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

之后，及时将15 mL～20 mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

培养和计数

待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2h。水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3 h。

    如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按相同条件进行培养。

 培养完成后，就要进行菌落计数了，计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units, CFU）表示。

    选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

结果与报告

    为了生成结果和报告，需要根据计数结果和公式计算出菌落总数。需要注意的是，对于菌落数量不同的培养皿，计数原则有所不同。 

    若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

    称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。

    自此，菌落计数的步骤就这样完成了。正确的技术结果要求严谨地操作过程，相信大家已经充分了解了。除了计数操作，质量控制也是微生物环境安全管理的重要一环。菌落计数知多少，想要了解有关质量控制的相关内容，就请关注我们的后续推送吧。