FastDNA SPIN Kit for Soil中文说明书

简介

FastDNA SPIN Kit for Soil的目的是从土壤样品中提供基因组DNA供PCR使用，在不到30min内，快速DNA提取方法排除使用有害的有机溶剂，如苯酚和氯仿。该试剂盒适用于土壤环境中所有的细菌、真菌、植物和动物的基因组DNA提取。

该试剂盒包括三个部分：

1、裂解

Lysing Matrix E tubes中含有的陶瓷和硅粒子，旨在有效地溶解所有不同来源的微生物，包括真细菌孢子和芽孢、革兰氏阳性菌、酵母菌、藻类、线虫和真菌。

2、MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer都经过精心挑选和准备，使完整的样本同质化和蛋白增溶，试剂能够以最小的RNA污染提取基因组DNA。

3、DNA纯化和洗脱试剂

GENECLEAN过程是他们用来纯化基因组DNA，程序纯化DNA用专门的硅胶基质的同时消除污染物，抑制并发生反应。

*Binding Matrix悬浮

*SEWS-M（盐乙醇洗，用前加100ml乙醇）

*DES（DNA洗脱液超纯水）

试验方案

样品处理：

1、添加500mg的土壤到Lysing Matrix E tube；

由于FastPrep仪器的移动，在管内看到大量的聚集，相同Lysing Matrix不应超过管的体积的7/8，留在管的空间，也提高了更好的同质化的机会；【见注1】

裂解：加入978ul Sodium Phosphate Buffer和122ul MT Buffer；【见注1】

2、在FastPrep仪器中混匀40s的速度6.0；

3、14000Xg离心Lysing Matrix E tubes 5-10min；【见注2】

4、上清转移到一个干净的2.0ml管中，加入250ul PPS试剂后混合，用手摇动管10次；

5、14000Xg离心5min沉淀，上清转移到一个干净的15ml管中，上清液加入1ml Binding Matrix Supension；（Binding Matrix在用之前重悬均匀）

6、放在一个旋转器或者

手工反转2min，让DNA结合基质，将管放架上静置3min，让硅胶基质沉淀；

7、小心去除500ul上清，避免碰到沉淀的Binding Matrix，弃上清，约600ul的混合物转移到SPINTMFilter，14000Xg离心1min，倒空Catch Tube，并把剩下的上清加到SPINTMFilter中离心过滤；

8、添加500ul SEWS-M到SPINTM Filter，离心1min，再14000Xg，倒出滤过液并把SPINTM Filter放回Catch Tube，14000Xg离心2min，在清干SPINTM Filter中的剩余EWS-M；

9、移动SPINTM Filter到新的Catch Tube，室温下风干5min；

10、加入50-100ul DES，轻轻的重悬，轻轻搅动滤膜用枪头或涡流/手指轻弹，重悬为高效的DNA洗脱二氧化硅矩阵，再14000Xg离心1min，转移洗脱的DNA到Catch Tube。

注释

请在进行提取之前阅读FastPrep DNA

【注1】：留下约0.25cc的空气空间，如果留下太少的空气空间，可能导致样品的损失，由于管故障或者变形，样品的损失是FastPrep运行期间由于温度升高使压力增加，在管内预留0.25cc的空气空间，足够防止FastPrep运行期间造成的损失；

【注2】：旋转15min，可增强消除从大量的样品或从复杂的细胞壁的细胞产生的过多的碎片。

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FastDNA SPIN Kit for Soil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤：

https://wenku.baidu.com/view/ad0bff1933d4b14e8424684b.html