组织RNA提取 Isolate RNA from tissue samples

1. 将组织在液氮中磨碎，每 50～100mg 组织加入 1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过 TRIzol 体积 10℅。

2. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质。可于 2～8℃ 10000× g 离心 10min，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量 DNA，上清中含有 RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

3. 每 1ml TRIzol 加入 0.2ml 氯仿，剧烈振荡 15s，室温放置 5min。

4. 2～8℃ 10000×g 离心 15min。样品分为三层。RNA 主要在水相中，水相体积约为所用 TRIzol 试剂的 60℅。

5. 把水相转移到新的 EP 管中加入等体积的异丙醇，室温放置 10min。

6. 2～8℃ 10000×g 离心 10min，离心前看不出 RNA 沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状白色沉淀。弃上清进行下一步操作。

7. 用 75℅冰预冷的乙醇洗涤 RNA 沉淀。每使用 1ml TRIzol 至少加 1ml 75℅乙醇。

2～8℃ 不超过 7500×g 离心 5min，弃上清。

8. 超净台中风干大约 5～10min。不要过于干燥，否则会导致 RNA 的溶解性大大降低。加入 25～200μl 无 RNase 的水使 RNA 溶解。