NIDVD Taq Hot StartTaq Version

荧光PCR（抗体修饰）

■产品说明            

本制品是抗Taq单克隆抗体和TAKARA公司rTaq酶的混合制品，适用于Hot StartPCR高温加热前，抗Taq单克隆抗体与Taq酶结合，抑制聚合酶活性，从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq单克隆抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤已变性，因此无需特殊失活处理，在常规PCR条件下即可使用。使用本试剂扩增得到的PCR产物的3’末端附有一个“A”碱基，可直接用于TA克隆。

■来源

E.coli 重组蛋白，鼠源抗体

■活性单位

2.5U/ul

■品质保证

酶纯度检测＞99%，无核酸内切、外切酶活性，也无核酸污染，抗体纯度＞95%。

■应用范围

RT-PCR、Hot Start PCR法扩增DNA、对流PCR。

■PCR性能

以λDNA为模板可以很好地扩增10kb的DNA片段。

50℃条件下反应1小时，抗体对聚合酶活性抑制效率达90以上。

■反应缓冲液

请使用随酶提供的10×PCR buffer

■保存条件

-20℃

■PCR体系

同TAKARA公司商品化酶rTaq。

■PCR条件

图片来自NIDVD

■抗体筛选实验数据

①Hiv模板，300bp;引物对3末端最后3个碱基完全互补;rTaq为商品化酶;

②抗体用Taq聚合酶保存缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml;

③抗体与酶混合后，水浴锅50℃孵育30min;

④正常方式配置PCR体系（30ul体系，含抗体酶1ul）;

⑤PCR扩增前，水浴锅37℃孵育60min;

⑥正常PCR（94℃、55℃、72℃各30s）

梯度模板评价数据（10倍稀释）

条件1：TAKARA公司rTaq酶;

条件2：TAKARA公司rTaq酶＋anti-Taq抗体;

条件3：TAKARA公司rTaq酶＋自制抗体;

条件4：TAKARA公司HS-Taq酶;

结果分析：

高浓度模板时，条件3引物二聚体抑制达90%以上;

低浓度模板时，目的条带扩增效果强于条件2的TAKARA公司Taq酶抗体，与条件4基本一致。

图片来自NIDVD

■RT-PCR稳定性评价数据

①2014年厦门地区HEV流调检测体系;

②Taqman探针;

③扩增产物长度：80bp;

④M-mlv：0.2ul;

⑤HS-Taq：0.4ul;

⑥50℃，15min;94℃，10min。

图片来自NIDVD

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