青春活动感悟

        #感悟三下乡，青春筑梦行#活动，本人承诺，文章内容为原创，且未在其他平台发表过。

        实验记录

1.实验时间：2017.7.30

2.实验名称：大肠杆菌对数期培养

3.实验材料和试剂：大肠杆菌、胰蛋白胨、NaCl、NaOH。

4.实验器材/设备：电子天平、摇床、高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台。

5.实验方法:配置LB液体培养基各100ml于A、B两锥形瓶内，LB液体培养基配方是：100mL水+1g胰蛋白胨+0.5g酵母的提取液+1gNaCl+200μL NaOH。将俩锥形瓶置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌。即在103.4KPa、121.3℃的灭菌条件下灭菌20分钟至30分钟。灭菌结束后，于无菌操作台将大肠杆菌接种于A锥形瓶内，37℃摇床过夜培养，转速200rpm。

1实验时间：2017.7.31

2实验名称：乌龟抗菌肽的诱导

3实验材料和试剂：大肠杆菌、乌龟。

4实验器材/设备：摇床、高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台、紫外分光光度计。

5实验方法:从摇床上取出A锥形瓶，于无菌操作台将4mLA锥形瓶内菌液加到100mL新的B锥形瓶LB液体培养基中，同样的温度下摇床摇动4h，此时的菌液即为对数生长期的大肠杆菌液。紫外分光光度计测625nm波长处的吸光度为0.587时，再稀释5倍，大肠杆菌浓度约为1.2X10^8个细菌。用针刺伤乌龟体表后浸泡在大肠杆菌悬液中，浸泡1h，然后将其在最适宜条件下饲养48h，诱导抗菌肽基因表达，此时针刺导致的损伤程度将直接影响诱导效果。

1实验时间：2017.8.2

2实验名称：龟类体表分泌物中抗菌肽的分离纯化

3实验材料和试剂：乌龟体表分泌液。

4实验器材/设备：纱布、低速离心机。

5实验方法:多重纱布过滤，去除可见性杂质；低速离心机离心，处理后的样品通过离心,可将杂质以及沉淀除去，离心机转速设为3000g，时间设定为15min；室温下于通风口过夜自然风干。

1实验时间：2017.7.26-2017.7.31

2实验名称：龟类体表分泌物中抗菌肽的分离纯化

3实验材料和试剂：养殖场龟池水、纱布、型号为001×7的即用氢型强酸阳离子交换树脂、Nacl、乙醇、碳酸氢钠、EDTA、。

4实验器材/设备：低速离心机、铁架台、层析柱、恒流泵、透析袋。

5实验方法:

2017.7.26

将养殖场龟池水经过多重纱布过滤，去除可见性杂质。然后低速离心机离心，取上清液，进一步去除杂质，获得500ml粗分离龟池水。离心机转速设为3000g，时间设定为15min。

2017.7.27

对强酸阳离子交换树脂进行预处理，取一定量的树脂用去离子水进行漂洗，每隔15min换水一次，浸洗时不时搅动，浸洗5次后，浸洗水不带褐色，泡沫很少。将树脂装柱，将经过粗分离的龟池水直接连续不断的过柱，以便使其充分吸附。抗菌肽所带的是正电荷，被树脂中的负电荷所吸附，因此龟池水中的抗菌肽就可以被吸附到阳离子树脂中。利用恒流泵控制速度为0.2ml/min。

2017.7.29

选用3mol/L的NaCl为洗脱液，洗脱吸附过抗菌肽的柱子，洗脱液为配制的500ml的3mol/L Nacl，利用恒流泵控制速度为0.2ml/min。

2017.7.31

透析袋进行预处理，把透析袋剪成20cm的小段，用400ml 50%乙醇煮沸1h，依次用 200ml 50%乙醇、1L 0.01mol/L碳酸氢钠、40ml0.5mol/LEDTA溶液洗涤，最后用蒸馏水反复冲洗，最后4℃保存于蒸馏水中。用透析袋透析，在透析袋内放置20ml洗脱液，用透析夹子夹住透析袋放置于盛有500ml去离子水的烧杯内。第一次透析时间为3h,第二次换水过夜透析。

1实验时间：2017.8.1

2实验名称：抗菌肽粗提液的抑菌实验

3实验材料和试剂：牛皮纸。

4实验器材/设备：烘箱、高压蒸汽灭菌锅、涂布器、接种环。

5实验方法:抑菌实验中将透析液和未透析液分为原液组、稀释一倍液组、稀释两倍液组以及一个空白对照组，抑菌实验选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌，即共需21个培养皿。首先，将洗得干净透明的培养皿晾干，用牛皮纸包好之后再用高压蒸汽灭菌锅将培养皿灭菌，即在103.4KPa、121.3℃的灭菌条件下灭菌20分钟至30分钟。再将灭菌后的培养皿取出放在38℃的烘箱里将其中的水珠烘干以供倒平板使用。一般过夜烘干即可。实验中所需要的涂布器和接种环也要在此次过程中灭菌以供使用。

1实验时间：2017.8.2

2实验名称：抗菌肽粗提液的抑菌实验

3实验材料和试剂：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、胰蛋白胨、NaCl、NaOH、琼脂。

4实验器材/设备：锥形瓶、电子天平、摇床、高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台、接种环。

5实验方法:培养皿烘干后，进行LB固体、LB液体培养基的配制。100mLLB液体培养基配方：100mL水+1g胰蛋白胨+0.5g酵母的提取液+1gNaCl+200μLNaOH。液体培养基配置三份，每份100ml分装在三个锥形瓶内。100mL固体培养基的配方：100mL水+1g胰蛋白胨+0.5g酵母的提取液+1gNaCl+200μLNaOH+1.5g琼脂。固体培养基配置1L。培养基配制好之后在103.4KPa、121.3℃的灭菌条件下灭菌30分钟。液体培养基完全冷却以供接下来的实验使用。抑菌实验选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌，需要先在已经冷却好的液体培养基中摇菌培养一段时间，因为防止有些细菌处于休眠或者无生命活性阶段。即在无菌操作台上在酒精灯旁用接种环将细菌接种至LB液体培养基锥形瓶内，然后在摇床上37℃恒温，转速为200培养12h。

1实验时间：2017.8.3

2实验名称：龟类体表分泌物中抗菌肽的抑菌实验

3实验材料和试剂：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌。

4实验器材/设备：恒温水浴锅、牛津小杯、无菌操作台、移液枪、恒温箱。

5实验方法:将恒温水浴锅温度设置为99℃，然后将固体培养基融化，冷却后在酒精灯旁边以及在无菌操作台上倒平板。依次将不同的细菌涂到平板上，各个培养皿上需要贴上相应细菌名称的标签以区分开来。每个平板中统一用移液枪加入200μL的已经摇好的菌液，然后在酒精灯旁边、超净工作台上将不同的细菌用涂布器涂布到培养基上。接种的全程都需要在无菌的环境下进行。在已经接种好细菌的每个培养基上均匀的放置3个牛津小杯，每杯滴加20μL的抗菌物质，再贴好标签以便接下来区分。抑菌实验中抗菌物质分为：透析液原液组、透析液稀释一倍液组、透析液稀释两倍液组、未透析液原液组、未透析液稀释一倍液组、未透析液稀释两倍液组以及一个空白对照组，然后37℃恒温箱培养。实验涂好菌、加好抗菌物质后就进行分组培养。放在37℃的恒温箱里培养8至12个小时，取出观察抑菌圈的大小。

实验感想

通过这次与同学之间合作做实验，我明白了交流与分配工作的重要性。良好的沟通能力能够避免误会，能够增加团队的凝聚力。而合理地安排大家的工作，能够充分利用个人时间，提高每个人的办事效率，从而提高团队的效率。