10X单细胞样本制备通识PPT ||Cell Prep Workshop for Single Cell RNA-seq Experiments

本文介绍了10X单细胞样本制备的一般方法，样本制备是一个探索的过程，特别是对一些没有测试过的物种（器官）来讲。为了建立起我们对样本制备的基本框架，下面先载一段：

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1. 用无菌剪刀或手术刀将组织切成2-4毫米的碎块。
2. 在冰上将碎组织加入适当的缓冲液或平衡盐溶液中，清洗2-3次。这里一般会采用预冷的生理盐水/PBS/培养基等等，此外为了减少细胞损伤，还可以根据情况添加 FBS 或者 BSA。
3. 加入适量的酶，并在最佳温度（通常为37°C）下孵育适当的时间，并间歇的混匀。消化时间与组织的类别很有关系，对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h， 对于容易消化的组织可以采用37℃ 震荡消化15~45min，也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可 以认为已消化充分。
4. 通过移液枪或研磨的方式轻轻分散细胞。这是单细胞制备至关重要的一步。过度的话，就会破坏细胞；不足的话，则会降低细胞收率。
5. 通过合适的滤网过滤细胞悬液。
6. 让细胞沉降并倒出多余的含酶液体。
7. 洗涤并重复2-3次。在适当的培养基或缓冲液中重悬细胞。细胞碎片可以在此步通过离心初步去除，通常条件为300g 或1000~1500 rpm 的条件下 5 min。
8. 使用台盼蓝或者荧光计数的方式对细胞数和细胞活性进行定量。
9. 如果需要，将细胞进行原代培养。

超详细单细胞悬液制备解决方案

PPT是给大家一个直观的认识：

• 细胞消化
• 细胞活性
• 细胞大小
• 杂细胞去除
• 试剂与仪器选择

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IUPUI Center for Medical Genomics, 10X scientists, and Miltenyi hosted a workshop on Cell Preparation for Single-Cell RNA-seq Experiments