冻春卷

CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 16-17 转染后验证

基础知识系列链接（节选）：

CRISPR-Cas9学习笔记
Cre-LoxP条件性基因编辑系统--学习笔记
FLP-FRT系统--诱导性基因编辑inducible gene editing

系列实验链接：

CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计
CRISPR-Cas9（三）--sgRNA设计好之后
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 1
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 2
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 3
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 4
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 5-15 转染验证

本期实验

上次我们提到需要将构建好的质粒，通过脂质体或者其他方式转染到293T细胞中进行验证，在经过一阵摸索之后，得到了>70%的转染效率之后，我们需要将基因组DNA提取出来。emmm因为实在是太累了，且文字描述的理解力远不如图片，做了一张这样的图。

CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 16-17 转染后验证_第1张图片

Snipaste_2019-03-16_20-07-15.jpg

其实这张图才是一直以来的精华所在，简洁的告知了思路，并且有会用到的实验技术以及预期的实验结果，这对什么都不明确的人来说，还是很重要的。

最后的T7 Endonuclease I digestion应该还要通过条带灰度值计算一下剪切效率的。

感谢师兄DZ

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