2021-08-24

回顾一下最近两天去实验室所学习到的东西，昨天看了有关转染方面的操作，首先，

1.准备转染所需材料：lip2000  小干扰   optiMEM培养基（无血清的培养基）RNA-free枪尖  无酶EP管（按照所需准备足够数量）

2.给准备好的无酶EP管内加入500ul（由于转染后放置于小皿中）optiMEM培养基，然后一半的无酶EP管中加入10ul的lip2000,剩余一半中一个设为空白对照，其余的都各加小干扰10ul，放置五分钟。其目的在于？之后将含有lip2000的液体加入放有小干扰的管中，充分混匀放置20min。

3.放置4~5小时后补液，补2ml无双抗的培养基。

今天看了病毒转染，回顾一下步骤：（在病毒转染操作的过程中需要关掉风机、空调等设备，所以一般在进行相关操作时尽量选择在无人时操作，以免为他人带来麻烦）

1.准备病毒转染所需材料：病毒原液  基培   polybleme(增强剂）无酶EP管（按照所需准备足够数量）

2.给准备好的无酶EP管内加入1ml基培（目的是无血清以便于病毒更好的转染），之后加入 polybleme(增强剂），（针对要加入的量根据已有的规格需要进行计算，如果是1mg/ml,则需要稀释为5ug/ml），再加入计算好体积的病毒原液（计算公式依据说明书上的来计算）。做好标记。

3.将其放置于孵箱内4个小时，之后补液，补1ml无双抗的培养基？切记：24小时内需要完成换液，换液时可以运用完培，72小时后显微镜下观察是否病毒转染成功，如若不行，则此次实验失败。