荧光偏振技术简介

  上期小编给大家介绍了关于蛋白质结构预测的网站，这期我们就不再介绍网站了。为了承上启下，使两期的内容有一定连贯性，今天就给小伙伴们介绍一种可以检测蛋白激酶活性的技术——荧光偏振技术。

  荧光偏振(FP)检测技术是一种以荧光标记的检测技术,它把荧光物质标记在特定物质上,使原本微弱的反应信号转化成较强的荧光信号,起到信号增强的作用。与此同时，在检测系统中加上起偏器和检偏器，当从光源发出的一束光线经垂直起偏器后成为垂直偏振光, 样品被垂直偏振光激发而产生偏振荧光, 此荧光经检偏器后可测出与样品浓度有关的水平或垂直方向的荧光偏振光强度。通过荧光强度和样品浓度制作工作曲线，就可以定量分析了，极大提高了方法的灵敏度和特异性。

  荧光偏振(FP)检测技术不需要分离游离和结合的示踪物，减少了研究人员的工作量，所有检测都可以在溶液中进行，具有快速、灵敏度高、特异性好、操作省时简便的优点。

  荧光偏振(FP)检测技术的应用：首先我们谈谈在蛋白激酶活性研究方面的应用。Panvera 开发了一种基于荧光偏振的蛋白激酶活性试剂盒，可方便快捷地进行蛋白激酶抑制因子和激活因子的筛选工作。

  其检测原理如下：将磷酸化底物进行荧光标记，蛋白激酶产生的磷酸化产物不进行荧光标记。让两种磷酸化产物与抗丝氨酸抗体（丝氨酸和苏氨酸是最常见的磷酸化位点,因为其结构末端含有羟基,羟基很活泼,可以与磷酸基团结合）相竞争结合。当反应液中没有蛋白激酶产生的磷酸化产物时，荧光标记的磷酸化物与抗体相结合形成复合体，由于复合体较大，运动速率相对较小，受偏振光激发后产生的激发光具有较大的偏振值；当反应液中含有蛋白激酶产生的磷酸化产物时，因二者竞争抗体的结合位点，结合到抗体上的荧光标记物较少，游离的荧光标记物在反应液中很多，发出的激发光偏振值减小。当蛋白激酶的活性越强，产生的磷酸化产物也就越多，与荧光标记物的竞争越激烈，对标记物产生的激发光的性质影响越大，因此偏振的改变直接与蛋白激酶的活性相关。利用这一原理可以检测蛋白激酶活性。

  当然，荧光偏振技术的运用远不仅于此，可以用来进行对单核苷酸多态性的筛选、参与实时荧光定量PCR-FP 技术、进行核酸结构变化研究、进行体外细胞损伤检测等。还可以与免疫技术结合，成为荧光偏振免疫技术，用来检测金属离子、微量药物浓度、毒物检测等。

好了，今天的介绍就到这里，希望对您有所帮助！后续更多精彩，敬请关注！

参考资料：

[1]赵晨,张亮,倪原. 荧光偏振技术在生命科学中的研究进展[J]. 现代生物医学进展,2010,10(16):3154-3156.

[2]朱广华,郑洪,鞠熀先. 荧光偏振免疫分析技术的研究进展[J]. 分析化学,2004(01):102-106.

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