外泌体-游离RNA提取方法及特点

BIOG产品特点

◎操作简便快速，可在半小时内获得理想的RNA；

◎提取RNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为1.8-2.0；

◎产量更高，较国内同类产品高出20%；

◎可用于小量（200μL）血清、血浆、胸腹水、脑脊液、滑膜液、水样等液体样本中游离样本中RNA的提取；

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂，安全无毒。

产品介绍

BIOG cfRNA Easy Kit是常州百代生物科技股份有限公司研制的专门用于血清、血浆、胸腹水、脑脊液、滑膜液、水样等样本中游离RNA（包括游离肿瘤细胞RNA、microRNA、病毒RNA等）的提取试剂盒。BIOG cfRNA Easy Kit采用了最新的优质进口离子膜，裂解液和洗脱液经过多次优化，能高效地分离RNA。提取得到的RNA较其它品牌的同类试剂盒产量更大，纯度更高，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染，可以直接应用于Northern杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。

操作步骤

1. 请自行准备：无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。

2. 取出洗涤液，按以下操作：

a)洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇，混匀；42mL加入18mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLRNA Carrier混合均匀，再加入300μL裂解液及20μL消化液，漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10分钟至完全裂解。

4. 加入1mL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内，将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。

7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL洗涤液B至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。

9.将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL离心管内，加入30-50μL洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，收集RNA溶液。

11.70℃保存，或直接用于下一步实验。

注意事项

1. 为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。

2. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

3. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于37℃水浴中溶解即可。