细胞支原体污染那些事儿

支原体污染是细胞培养中的一个主要问题。支原体对细胞培养中常用的大多数抗生素具有耐药性。

小海星今天和大家一起了解一下以下内容：

1. 细胞培养中支原体污染的发生率和来源，细胞培养中最常见的支原体种类；

2. 可用于检测支原体的各种技术

细胞培养中支原体污染的发生率和来源，细胞培养中最常见的支原体种类

在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。细胞培养中有几种支原体污染与人、牛和猪有关。实验室的工作人员是口腔支原体、发酵支原体和人型支原体的主要来源。这三种支原体占细胞培养中支原体污染的一半以上，它们主要存在于人的口咽部。精氨酸支原体和无胆甾原体是另两类细胞培养中的支原体，它们来自胎牛血清和新生牛血清。胰酶如果是猪来源的，那么也可能存在猪鼻支原体。

可用于检测支原体的各种技术

① 试剂盒检测法：

目前已有专门做支原体检测的试剂盒，可以用细胞滴片进行检测。

② 观察细胞的形态和生长特征：

支原体污染比较严重时可出现生长减慢，有的培养基pH明显变酸，并出现细胞病变，以此可依次对支原体污染进行检测，但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似，因此不能准确诊断。

③ 分离培养法：

大多数支原体可出现特有的典型菌落。因而可依次尽心检测，该方法准确、可靠，但时间长，敏感性不够高。

④ DNA结合荧光素染色法：

利用荧光染剂（bisbenzimide,Hoechst 33258）侦测支原体污染。荧光染料会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。

⑤ 电子显微镜和免疫电子显微镜法：电子显微镜或者免疫电镜下对样本进行观察，此法较准确，但受条件限制，时间长，敏感性不高。

⑥ 间接免疫荧光法和免疫印迹：简便、快速、特异性强。

⑦ 使用支原体通用引物，PCR扩增检测支原体。