鼠单克隆抗体制备

 

1.小鼠单克隆抗体

小鼠单克隆抗体是由激活的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞产生的，既能分泌抗体又能无限增殖的鼠源单克隆抗体。

 

 

 

2.小鼠单克隆抗体制备方法

卡梅德生物能够为客户提供两种方式的小鼠单克隆抗体制备服务，一种是利用噬菌体抗体展示技术制备重组单克隆抗体；另一种是利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞系。

传统单克隆抗体技术是指由骨髓瘤细胞和分泌抗体的B淋巴细胞融合（全人源单克隆抗体制备技术除外）后形成杂交瘤细胞并分泌单克隆抗体，由于其只作用于抗原复合分子上某一抗原决定簇，因此具有专一性强、效价高等特点。

3.小鼠单克隆抗体制备优点

小鼠是生物学和医学领域中常见的模式动物之一，鼠单抗也是常用的单克隆抗体，具有特异性强，可快速、大量、连续生产等优势。 

4.卡梅德生物多种鼠单抗优势产品

基于成熟的抗体平台体系建设，卡梅德生物目前生产有多种类型的鼠单抗产品。其中标签抗体如HRP标记小鼠抗人IgG(FC)（Cat：SA2265），动物疫病抗体如小鼠抗猪伪狂犬单克隆抗体（Cat：ANAB1024），小分子抗体如青霉素小鼠单抗（Cat：PA042），用于WB、Elisa检测等多种项目。

 

5.卡梅德生物可以提供高质量的小鼠单克隆抗体制备服务

卡梅德生物提供的小鼠单克隆抗体制备服务，流程主要包括：抗原制备-小鼠免疫-细胞融合-细胞筛选-细胞亚克隆-腹水生产-腹水纯化。

 

 

5.1抗原准备

客户提供抗原，可接受蛋白，多肽以及各种小分子抗原，和弗氏佐剂一起混合进行免疫。

 

 

5.2小鼠免疫

准备5只Balb/c小鼠，间隔14天进行免疫源注射，采血进行效价检测。

5.3细胞融合、筛选和亚克隆

选取血清效价满足要求（蛋白/病毒>105；多肽/小分子>104）的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，有限稀释融合细胞，96孔板克隆化， HAT筛选杂交瘤细胞，经免疫原检测，挑选1-10个阳性克隆，进行亚克隆扩大培养到96孔板， ELISA筛选阳性亚克隆，并进行扩大培养，小鼠经过融合、有限稀释法的一次克隆及上清检测，得到多株符合项目要求的细胞株，选择4个细胞株进行后续腹水制备。

5.4腹水抗体纯化

 客户选取的杂交瘤细胞制备腹水，Protein A/G法进行腹水纯化。

5.4.1 蛋白A/G-Sepharose柱的处理

1. 选择合适的层析柱，清洗干净，并垂直固定在铁架台上。
2. 取适量的蛋白G-Sepharose的乙醇悬浮液，静置等胶沉淀后吸去上层乙醇，再用结合缓冲液多次悬浮彻底洗去乙醇。
3. 将结合缓冲液与蛋白A/G混合成50-70%的浆状物，把浆状物倒入柱内。
4. 连接蠕动泵，以50cm/h（对于直径1cm的柱相当于0.7ml/min）的速率装柱，待柱体完全沉降后，继续用5～10倍体积的结合缓冲液清洗柱体。

5.4.2 样品处理与上样

1. 腹水样品 12,000×g，离心10min后，取上清进行0.45μm孔径过滤。
2. 上样:将过滤好的样品液以0.4ml/min流速加入亲和柱内。
3. 样品进入介质后，将流速调低至0.7ml/min，继续用10倍体积结合缓冲液清洗，直到A280值恢复到本底水平（＜0.02）。

5.4.3 样品洗脱

1. 保持速率不变，换洗脱缓冲液洗脱结合在柱中的抗体，洗脱液以2ml为洗脱组分分部收集（2ml/管）。收集试管中要加入0.1ml中和缓冲液，以便及时中和洗脱所得抗体液的PH值。
2. 检测每管的A280，当A280<0.05时停止洗脱，汇集A280大于等于0.2的峰组分。
3. 若需要除去盐分或改变缓冲液，可以在磷酸盐缓冲液（PBS）中透析，或在其它特定的溶液中透析。

5.4.4 纯度鉴定

电泳：取纯化好的蛋白按照4:1比例加入5Xloading buffer后100℃煮样10min，取10ul上样进行SDS-PAGE电泳：120v，90分钟后，考马斯亮蓝染色30min后进行脱色。

5.5交付

卡梅德生物交付3-5株阳性克隆株，高特异性与高亲和性的小鼠单克隆纯化抗体，实验报告和鉴定报告：包括SDS-PAGE、ELISA检测等结果，并根据客户需求，提供抗体验证结果，如Western Blot、IHC、IP、IF等。

小鼠单克隆抗体是最常用的单克隆抗体之一，在肿瘤诊断治疗、细胞表面抗原检测、机体微量成分测定等领域大量应用。因此制备高特异性、大规模生产的抗体是科研用户的主要需求。卡梅德生物积累了充足的抗体制备经验和专业技术，可为您提供鼠单抗定制完整的上下游服务。