2021-06-25 点亮RNA——CRISPR/Cas系统

        点亮RNA——RNA可视化与追踪的方法有很多，其中基于CRISPR/Cas系统的活细胞RNA可视化是近年来随着CRISPR相关技术发展而衍生的。目前有基于CRISPR/Cas9和CRISPR/Cas13两套系统可以进行RNA的可视化分析。

        CRISPR/Cas9最初开发出来是应用与靶向DNA的基因编辑系统，而将Cas9的核酸酶功能域突变后可以获得结合DNA但不切割DNA的dCas9，使用CRISPR/dCas9融合GFP等荧光蛋白或者荧光标记的sgRNA可以进行DNA的可视化。而之后又发现CRISPR/Cas9系统在人工合成的一段DNA（称为PAMmer）的辅助下可以靶向RNA，借助这种特性，研究者开发了可以进行RNA可视化和追踪的dCas9-GFP系统[1]。

基于CRISPR/dCas9的RNA可视化

        随着CRISPR/Cas9技术的发展，研究者又鉴定到了一类特异靶向RNA的CRISPR系统——CRISPR/Cas13，同样通过缺失Cas13的核酸酶活性，可以获得结合RNA而又不切割RNA的dCas13。使用CRISPR/dCas13融合GFP等荧光蛋白，同样可以实现细胞内RNA的可视化与追踪[2]。

基于CRISPR/dCas13的RNA可视化

Reference

1.Nelles, David A. et al. Programmable RNA Tracking in Live Cells with CRISPR/Cas9. Cell (2016).

2.Yang, L. Z. et al. Dynamic Imaging of RNA in Living Cells by CRISPR-Cas13 Systems. Mol Cell 76, 981-997 e987 (2019).