养细胞 2018-10-31

最近开始做实验了，还是要好好记录，好记性不如烂笔头～

以前没有养过细胞，唯一接触过的细胞是爪蟾卵母细胞，但它又不能传代，每次用每次从爪蟾肚子里取。注射完cRNA后，17度培养3天就用来做实验了。

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每两天传代一次

C6/36, Aag2, NPC四天一传

扩毒的C6/36细胞通常培养六天

现在实验室会用到的细胞：血清10%

NPC 

SHSY  DMEM/F12培养基  

BHK  用于空斑实验 DMEM培养基  37度培养 通常1传5

C6/36  1640培养基 30度培养  不需要CO2

Aag2   SDrosophila培养基   30度培养 不需要CO2

RD    MEM培养基   37度培养

Vero    MEM培养基 其一用PBS洗细胞三次以后，将胰酶加入培养瓶，10秒左右去掉胰酶，放入37℃培养箱消化，每隔10秒左右轻轻晃动培养瓶，直到观察到有流沙状细胞滑动。其二是用PBS洗细胞三次以后，将胰酶加入培养瓶，一分钟以后倒置，将有细胞的面朝上，然后轻轻拍打，使细胞脱落。这两个小tips都很适用的，因为相对于拍打和37℃消化而言，胰酶消化的时间过长，后者引起的细胞伤害更严重。当然除此之外，养Vero细胞和普通细胞一样：要注意无菌操作、不要看细胞太勤、注意轻拿轻放、传一瓶拿一瓶、让细胞尽可能多的享受自己最适的生活环境。做到这些，你的细胞养不好都难。

NPC  悬浮 接毒前NeurCult-XF培养基（05760）+Matrgel (1:100) 传到板子上，使其贴壁

            配培养基要加 rhEGF(到200ng/ml) rhFGF(到20ng/ml) Hepran (2mg/ml)

293T  生长快，通常倍增时间不到一天。每3~4 天1：10至1：20稀释，5% CO2条件下培养。细胞贴壁疏松，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶过度消化。

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 常用的培养基有哪些？

MEM（Minimum Essential Medium）: 也称最低必须培养基，它仅含有12种必须氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。可以广泛应用到各种细胞培养。

DMEM：分为高糖和低糖，碳酸氢钠缓冲体系，所以需要CO2。

高糖的适合于高密度悬浮细胞培养，适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的细胞。 低糖的适合于生长速度较快，附着性较差的肿瘤细胞培养。

DMEM/F12：F12 培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较条件下哺乳动物细胞培养。

RPMI-1640：主要用于悬浮细胞培养，广泛用于哺乳物，特殊造血细胞，正常或者恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞。 另外K-562， L-60、urkat、IM-9 等淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞也可以使用。

McCoy’s 5A: 主要用于肉瘤细胞的培养， 还可以用于骨髓、皮肤、肺等原代培养，用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。比如HT29，BHL100等上皮细胞。

IMDM（Iscove’s Modified Dulbecco Medium）：主要用于红细胞和巨噬细胞前体培养。培养液中含有微量元素硒以及额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠以及HEPES。

M199 Medium是具有确定化学成分的细胞培养液，主要用于鸡胚成纤维细胞培养，培养时必须辅助血清才能长期培养。

L-15(Leibovitz Medium) 适用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株，用于快速增值瘤细胞的培养。

Ham’s F-10: 适用于小鼠细胞以及人的二倍体细胞的培养

Ham’s F-12: 适用于单细胞培养或者克隆培养， 是无血清培养基中常用的基础培养基。

MCDB131： 适用于培养内皮细胞。

Opti-MEM I Reduced Serum Media: 适用于培养造血细胞。

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