产品特点
◎提取RNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.8-2.0;
◎产率高,同样的样本量提取的RNA更多;
◎提取纯化的RNA应用范围广,可应用于Northern杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、cDNA 文库构建等各种分子生物学实验。
产品介绍
BIOG RNA Urine Kit是常州百代生物科技股份有限公司研制的专门用于尿液的RNA的试剂盒。BIOG RNA Urine Kit采用了最新的优质进口离子膜,裂解液和洗脱液经过多次优化,能高效地分离RNA。提取得到的RNA较部分其它品牌的同类试剂盒产量更大,纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类、DNA等杂质污染,可以直接应用于Northern杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。
操作步骤
1. 请自行准备:无水乙醇、10mL无RNA酶离心管、1.5mL无RNA酶离心管。
2. 取出析出液和洗涤液,按以下操作:
a) 析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇,混匀;9mL加入51mL无水乙醇,混匀。
b) 洗涤液:18mL加入42mL无水乙醇,混匀;36mL加入84mL无水乙醇,混匀。
c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
3. 取尿液5mL(尿液的取用量在1-5mL范围内)置于10mL无RNA酶离心管中,5000 rpm离心5分钟,弃去多余上清,剩余200μL上清,振荡混匀。
4. 加入200μL 裂解液和20μL消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。
5. 加入500μL析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。
6. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置2 min,12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。
7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液至吸附柱内,静置2 min,12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液至吸附柱内, 12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 min,离去残留的洗涤液。
9. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL无RNA酶离心管内,加入40 μL洗脱液,静置3 min,12,000 rpm 4℃ 离心2 min,收集RNA溶液。提取
的RNA即可用于下一步实验或-70℃保存。
注意事项:
1.析出液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。
2.裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于37℃水浴中溶解即可。
3.为防RNA酶污染,实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩,使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水。
4.提取的RNA如暂不使用,应-70℃保存,可适当加入RNA保护因子(货号:51090,一般40μLRNA溶液加入2μL)。