血管生成实验-迪医明生物

一、技术简介

血管形成（Angiogenesis）是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉新的毛细血管性血管的生长。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1-2 mm，都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。小管形成实验是测量在体外血管生成一种快速的，可量化的方法。

二、实验耗材

表1 血管形成实验所需耗材

三、实验步骤

以96孔板为例：

① 每孔加入基质胶，避免产生气泡，迅速转动铺匀；

注意：实验的96孔板始终置于冰上，基质胶插在碎冰内。

② 盖上96孔板盖子，准备一张浸过水的纸巾，制成一个湿盒；

③ 将96孔板放入湿盒，将湿盒放入培养箱，孵育45分钟左右，等待胶凝结；

④ 准备细胞悬液：当人脐静脉内皮细胞生长至对数期，密度为70%-90%之间时，将HUVEC细胞消化下来，用含有10%FBS的DMEM培养基进行终止，1200rpm离心，用Deeming人脐静脉内皮细胞专用培养基重悬，调整细胞密度，充分混匀；

⑤加入细胞悬液，根据实验需要接种对应数量细胞，重复3个孔；

注意：保持枪头垂直在孔的上方，不要戳到下边的凝胶。

⑥ 37℃，CO2培养箱内孵育，4小时后可见血管形成。

4.血管形成实验结果

血管形成（HUVEC+RFP细胞）   

血管形成（人脐静脉内皮细胞）

注：以上数据为应用迪医明生物原代细胞分离技术以及原代内皮培养体系所得P1和P10代数据。不同的原代分离技术与不同的培养基，会导致较大的结果差异。