HE染色法的原理及步骤

HE染色法的原理及步骤

HE染色原理

HE 染色法为苏木精-伊红染色法,是石蜡切片技术里常用的染色法之一,也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基础、最广泛的技术方法。

属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色,为酸性的伊红使细胞着红色,其结果胞核呈蓝色,胞浆呈红色。两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率,在光镜下呈现出细胞图像。

HE染色法之所以成为细胞染色最常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外,还有物理作用中吸附、吸收效果,使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。

实验步骤

1、样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS洗涤3次。

2、样品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min。

3、染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤。

4、分色:镜下观察,若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。

5、染胞质:浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤。

6、吹干或自然晾干细胞爬片后,中性树胶封片。

若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min,伊红5min即可。

实验相关用品

1、固定液:常用95%乙醇和冰丙酮

2、苏木精染液:称取苏木精粉0.5g,铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中,然后取NaIO 31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均匀,滤纸过滤,备用。

3、伊红染液:称取0.5g水溶性伊红染液,溶于100ml蒸馏水中。

4、稀盐酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%盐酸。

5、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。

6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。

实验结果

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。

HE染色试剂盒常见规格为310ml和3100lm。

本篇文章转自生化试剂。

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