pyrEF双筛系统介绍

pyrE基因编码乳清酸磷酸核糖基转移酶 (Orotate phosphoribosyl transferase)。

  基于pyrE基因可实现双向筛选：1)该基因缺失，会造成突变株无法从头合成尿嘧啶，导致细菌死亡；2)该基因存在，可将培养基中5-FOA转化为5-FU，而5-FU可掺入DNA和RNA分子中导致细菌死亡。换言之，pyrE基因缺失突变株不能在尿嘧啶限制性培养基中生长，而含有pyrE基因的菌株不能在含有5-氟乳清酸(5-fluoroorotic acid，5-FOA，可转化为5-FU)的培养基中生长。因此，pyrE基因可作为正向(含有pyrE生存)和负向(含有pyrE基因死亡)筛选标记。

pyrF基因编码乳清苷-5’-单磷酸脱羧酶(orotidine-5′-monophosphate decarboxylase)。原理同pyrE。

该双筛系统在古生菌Sulfolobus，Haloferax, Haloarcula，细菌Clostridium，Pseudomonas putida，以及一些病原菌Treponema denticola等中都可以使用。