操作步骤：
1. 请自行准备：无水乙醇、异丙醇、PBS、1.5mLRNase-free 灭菌离心管。
2. 取出洗涤液，按以下操作：
a) 洗涤液 A：21mL 加入 9mL 无水乙醇；42mL 加入 18mL 无水乙醇，混匀。
b) 洗涤液 B：18mL 加入 42mL 无水乙醇；36mL 加入 84mL 无水乙醇，混匀。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在 37℃溶解，摇匀后使用。
3. 取 200mg 的粪便于 1.5mL RNase-free 灭菌离心管中 (若粪便样本为液态，取 200μL 于离心管中)，加入 1mL PBS 充分振荡混匀，300g离心 5 分钟，收集上清。取收集的上清液 0.9mL 于 1.5mL RNase-free 灭菌离心管中，12000 rpm 离心 5 分钟，弃 0.8mL 上清，振荡重悬剩余沉淀和液体。a) 对于革兰氏阴性菌和一般的革兰氏阳性菌、肠道脱落细胞，直接进行骤 步骤 4 操作; b) 对于细菌壁较厚的革兰氏阳性菌、真菌、细菌芽孢等须首先进行破壁处理，可将上述沉淀用少许液氮反复研磨 3 次，再进行步骤 4 操作。
4. 加入 200 μL 裂解液， 20μL 消化液，充分振荡混匀，65℃水浴 10 分钟。
5. 加入 450μL 异丙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响 RNA 的提取与后续实验。
6. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液全部转入吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液。
7. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内，静置 1 分钟，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液。
10. 按每份样本 40μL 取洗脱液（如 10 份提取样本，即取 400μL 洗脱液），放置于灭菌 1.5mL 离心管，65℃预热。
11. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心 2 分钟，离去残留的洗涤液。
12. 取出吸附柱，放入新的 1.5mL RNase-free 灭菌离心管内，在吸附柱中心加入 40 μL 预热洗脱液，静置 2 分钟，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，收集 RNA 溶液。提取的 RNA 即可用于下一步实验或-70℃保存。
注意事项：
1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。
2. 为防 RNA 酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无 RNA 酶的容器和无 RNA 酶的超纯水。
3. 提取的 RNA 如暂不使用，应-70℃保存，可适当加入 RNA 保护因子（货号：51090，一般 40μLRNA 溶液加入 2μL）。