唾液DNA提取过程中的注意事项

操作步骤

1. 请自行准备:无水乙醇、1.5 mL 离心管、2.0 mL 离心管。

2. 取出析出液和洗涤液,按以下操作:

a) 洗涤液 A:21mL 加入 9mL 无水乙醇,混匀;42mL 加入 18mL 无水乙醇,混匀。

b) 洗涤液 B:9mL 加入 21mL 无水乙醇,混匀;18mL 加入 42mL 无水乙醇,混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在 37℃溶解,摇匀后使用。

3. 取 300μL 唾液至离心管中,加入 4μL DNA Carrier 混合均匀,加入 200μL 裂解液及 20μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴 10 分钟。

4. 加入 1mL 无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响 DNA 的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内,将 760μL 上述溶液转入吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液;

6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余 760μL 溶液转移至吸附柱内,重复步骤 5。

7. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液。

9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心 2 min,离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 离心管内,加入 30-60 μL 洗脱液,静置 3 min,12,000 rpm 4℃ 离心 2 min,收集 DNA 溶液。提取的 DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项:

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。

2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于 37℃水浴中溶解即可。

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