唾液DNA提取过程中的注意事项

操作步骤

1. 请自行准备：无水乙醇、1.5 mL 离心管、2.0 mL 离心管。

2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：

a) 洗涤液 A：21mL 加入 9mL 无水乙醇，混匀；42mL 加入 18mL 无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液 B：9mL 加入 21mL 无水乙醇，混匀；18mL 加入 42mL 无水乙醇，混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在 37℃溶解，摇匀后使用。

3. 取 300μL 唾液至离心管中，加入 4μL DNA Carrier 混合均匀，加入 200μL 裂解液及 20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴 10 分钟。

4. 加入 1mL 无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响 DNA 的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内，将 760μL 上述溶液转入吸附柱内，静置 2 分钟，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液；

6. 将吸附柱放回收集管内，将剩余 760μL 溶液转移至吸附柱内，重复步骤 5。

7. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内，静置 2 分钟，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液。

9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心 2 min，离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 离心管内，加入 30-60 μL 洗脱液，静置 3 min，12,000 rpm 4℃ 离心 2 min，收集 DNA 溶液。提取的 DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于 37℃水浴中溶解即可。