2021-08-04 mRNA display

        mRNA display，即mRNA展示技术，又称为mRNA-蛋白质融合体展示技术，是一种体外筛选多肽和蛋白质的技术，可用于生物分子配体的鉴定和相互作用分析。

        其基本方法是：化学合成编码多肽库的DNA库，并对DNA进行特殊加工，在5′端添加T7聚合酶启动子、翻译增强子、翻译起始密码子等序列；在3′端添加亲和纯化标签。在体外利用T7 RNA聚合酶将DNA转录成RNA，把RNA的3′端和带有嘌昤霉素的RNA接头结合，经过无细胞系翻译体系的体外翻译，合成相应的蛋白质，并且在mRNA3'端合成蛋白质时，嘌呤霉素以tRNA类似物的形式进入核糖体，形成mRNA与其所翻译的蛋白质结合的mRNA-蛋白质融合体。从而实现了基因型（mRNA）和表型（蛋白质）的结合。一般利用翻译蛋白所带的亲和标签，用亲和层析技术将mRNA-蛋白质融合体纯化出来，并对mRNA进行反转录，生成cDNA-mRNA-蛋白质融合体。采用ELISA、磁珠法等，将筛选的靶物质固定化于固相载体上，含有目标蛋白的cDNA-mRNA-蛋白质融合体就能通过与固相载体上的靶物质特异性结合而得到分离。通过洗脱液将猎物cDNA-mRNA-蛋白质融合体洗脱下来，加酶分解得到cDNA，将其进行PCR，所得产物进入下一轮循环。经过多次循环，目标蛋白及其编码的基因序列最终得到富集和分离。

Ref.

张万巧，王建，贺福初。mRNA展示技术，2006，生物化学与生物物理进展。