高效减少组织自发荧光,提高信噪比

在免疫组化检测过程中,许多样本组织会产生可通过各种波长滤光片的组织内源性自发荧光,干扰抗体标记的目的蛋白荧光的观察,甚至导致实验失败。为了解决免疫组化实验中的自发荧光,VectorLabs公司(国内代理商欣博盛生物)专门开发了一款Vector® True VIEW™ Autofluorescence Quenching Kit试剂盒,该产品旨在去除组织切片中由于醛固定、红细胞以及胶原蛋白/弹性蛋白结构造成的自发荧光。该试剂使用方便,无需稀释操作,为即用型试剂。 该试剂盒中含有防自发荧光效果excellent的VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 封片剂(含或不含DAPI两种)。客户无需单独购买封片剂,经济、实用。

注意:该试剂盒对脂褐素造成的组织自发荧光无效。

● 试剂盒组成: 

a. Vector®TrueVIEW™ Reagent A 5ml b. Vector®TrueVIEW™ Reagent B 5ml c. Vector®TrueVIEW™ Reagent C 5ml d. VECTASHIELD Vibrance Antifade Mounting Media 2ml e. VECTASHIELD Vibrance Antifade  Mounting Media with DAPI 2ml

其中,货号SP-8400包含a,b,c,d四个组分;货号SP-8500包含a,b,c,e四个组分

● 产品使用方法:

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将ReagentA、B、C以1:1:1的比例混合。(注意混合顺序,先将A和B以1:1比例混合10s,再加入C,混匀10s)

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将混好后的TrueView试剂滴加到组织样本切片上,将样本完全覆盖,孵育2-5min

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使用PBS缓冲液洗片5次,除去多余缓冲液,VECTASHIELD Vibrance Media封片后观察

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● 产品特征 

A 显著降低背景染色并保留特异性抗原染色; B 提高信噪比; C 产品稳定,储存在滴瓶中,使用方便; D 操作简单,快速;整个染色过程仅需2-5min; E 为使用者提供清晰、明确、真实的染色结果; F 适用于多种荧光染料的自发荧光去除,包括Alexa488,Alexa 594,DyLight 488,DyLight 594,FITC,Cyanine 5和GFP;

G SP-8500试剂盒中的封片剂中DAPI浓度较高,可对细胞核进行清晰的染色。

● 产品对自发荧光淬灭效果:

◆ 右图为经Vector®TrueVIEW™kit处理后,人肾脏组织切片中自发荧光淬灭的百分比与处理时间之间的关系。 ◆ Note:2分钟内即可达到最大淬灭效果。

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● 产品应用举例:  

> 案例一

未经任何处理 使用Vector®TrueVIEW™处理

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◆ 上图为人脾脏组织染色结果:使用VectaFluor TM Duet试剂盒(DK-8818)检测的mouse anti-CD20(red)和rabbit anti-Ki67(green)对人脾组织切片的染色。 ◆ 左图为未经任何处理的染色结果, ◆ 右图为使用TrueVIEW™Autofluorescence Quenching试剂盒染色结果。于未经处理的染色结果相比,经TrueVIEW™Autofluorescence Quenching试剂盒处理后,自发荧光显著减少。

> 案例二

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◆ A-D图为人肾脏切片(石蜡切片)染色结果,实验中使用anti-AE1 /AE3抗体对角蛋白进行染色(绿色)。◆ A图未经处理, ◆ B-D图经TrueVIEW™Quencher Kit处理。自发荧光明显减弱。延长曝光时间,阳性信号强度也随之增强。

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> 案例三

未经任何处理 使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI处理

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◆ 上图为人胰腺组织染色结果:绿色为insulin的染色。
◆ 左图为未经任何处理的染色结果,
◆ 右图为使用TrueVIEW Treatment Mounted with Vibrance + 3x DAPI(SP-8500)试剂盒染色结果。与未经处理的染色结果相比,经该试剂盒处理后,自发荧光显著减少,核染色显著增强。

> 案例四

未经处理(内源性自发荧光)   经TrueVIEW™Quencher Kit处理

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Company A Company B Company C

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Copper Sulfate Solution Sodium Borohydride Sudan Black B

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● 产品订购信息 Vector® True VIEW™ Autofluorescence Quenching Kit

产品 货号 规格 染色切片数
Vector® True VIEW™Autofluorescence Quenching Kit SP-8400 15ml 100-150
Vector® True VIEW™Autofluorescence Quenching Kit SP-8500 15ml 100-150
VECTOR TrueVIEW  
Autofluorescence Quenching Kit (3ml)
SP-8403 3ml ~30
VECTASHIELD® HardSet™Antifade Mounting Medium H-1400 10ml 100-150
VECTASHIELD® HardSet™with DPI Antifade Mounting Medium H-1500 10ml 100-150

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