石蜡包埋组织RNA提取步骤

 产品特点

◎裂解液、消化液经专门优化，无需过夜温育即可从福尔马林固定的、石蜡包埋组织中高效纯化基因组RNA；

◎提取的RNA纯度高，A260/A280为1.8-2.0；

◎产率高，同样的样本量提取的RNA更多。

产品介绍

BIOG RNAFFPE Tissue Kit专为快速高效的从福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本中提取RNA而设计。试剂盒使用我司特别研制的裂解液释放组织中的RNA，并使用反复优化的消化液去除RNA交联和已经降解的小片段RNA。BIOG RNAFFPE Tissue Kit采用进口离子膜吸附RNA，而大多数蛋白质、多糖和脂类物资则被去除。较其它品牌的同类试剂盒产量更大，纯度更高，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染，可以直接应用于Northern杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。 

操作步骤：

[if !supportLists]1. [endif]请自行准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。

[if !supportLists]2. [endif]取出析出液和洗涤液，按以下操作：a)析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加入51mL无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇，混匀；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。

[if !supportLists]3. [endif]样本处理：a) 取5-8 μm 厚石蜡切片5-10张，60℃放置5分钟，放入装有二甲苯的玻璃瓶中，浸泡10分钟后，用手术刀或刀片，将组织刮下，放入1.5 mL离心管。也可将石蜡切片60℃放置5分钟后，直接放入含1.2 mL二甲苯的1.5 mL离心管，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2min，弃上清。b）石蜡块：手术刀刮取20-30 mg石蜡包埋组织样本（尽量去除石蜡部分），放入1.5 mL离心管，加入1 .2mL二甲苯，震荡脱蜡10分钟，12,000 rpm室温离心2min，弃上清。c）福尔马林固定、未包蜡样本：取30 mg样本，用手术刀剪碎，置于1.5 ml离心管中，加入500 μL生理盐水，涡旋振荡20秒， 12,000 rpm室温离心2 分钟，弃上清。重复2次，转步骤6处理。

[if !supportLists]4. [endif]在上述处理过的脱蜡样本管中加入1.2mL无水乙醇，旋涡震荡30 秒，12,000 rpm离心2分钟，弃上清（注意不要倒掉沉淀，少量乙醇可用吸水纸吸去，未包蜡样本不需此步）。

[if !supportLists]5. [endif]开盖，室温放置5分钟，去除残留无水乙醇。

[if !supportLists]6. [endif]加入100 μL生理盐水，震荡混匀20秒；加入200 μL裂解液，20μL消化液A，振荡混匀，室温放置5分钟。

[if !supportLists]7. [endif]加入20 μL消化液B，震荡混匀，56℃水浴90分钟至组织完全消化裂解。（最好消化至溶液中无组织碎片，皮肤、肺脏、子宫等结缔组织较多的切片应适当延长消化时间。）

[if !supportLists]8. [endif]加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。

[if !supportLists]9. [endif]将吸附柱放入收集管内，将混合物吸入吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

[if !supportLists]10. [endif]将吸附柱放回收集管内，加500 μL洗涤液至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，弃收集管内废液。

[if !supportLists]11. [endif]将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm离心2分钟，离去残留的洗涤液。

[if !supportLists]12. [endif]取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-100 μL洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃离心2分钟，收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-70℃保存。

注意事项：

1. 为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。

2. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

3. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于37℃水浴中溶解即可。