“高通量测序”这词我想大部分人都不会感到陌生，因为现如今它算得上是一个比较热门的领域，但是您又知道多少关于高通量的知识呢？接下来小编来聊聊它的前世以及今生，带您走进高通量测序的世界。
所有事物的出现都是有必然联系的，不可能凭空出现。对于高通量测序而言也是一样的。随着科学技术的进步，人们对环境中微生物的探索也从未终止过。先前依赖于传统的平板纯培养法，然而却多达99%的微生物在现有实验条件下无法得到培养鉴定。因此，基于非培养方法的高通量测序技术应运而生。
高通量测序技术（又称下一代测序技术）是近年来发展的一项技术，能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，具有高效性等特点。随着科技的进步，高通量测序技术也在逐步的进行更新。
前世
Sanger法第一代测序技术（双脱氧核苷酸末端终止法）：利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物，直到掺入一种链终止核苷酸为止。由于存在成本高、速度慢、通量低等不足，逐渐被淘汰。
今生
第二代测序技术（主要包括Roche 454焦磷酸测序，Illumina Solexa测序和ABI SOLID测序），各自优缺点如下：
Roche 454焦磷酸测序技术——依靠生物发光进行DNA序列分析。
优点：读取序列长（400 bp）、可进行从头测序（de novo sequence）；
缺点：无法判断重复碱基个数。
Illumina Solexa测序技术——原理是可逆终止化学反应。
优点：高度自动化系统、读取片段多、适合大量小片段的测序（microRNA、lncRNA等）；
缺点：读取序列较短、不适于de novo sequence。
ABI SOLID测序技术——核心是4种荧光标记寡核苷酸的连接反应。
优点：每个碱基读取两次非常高的准确性，特别是对于SNP的检测；系统灵活可以进行样本的pooling、分割测序区域；
缺点：读取长度受连接反应限制。
以上三种测序方法各有优缺点，目前科学研究中普遍运用的是Illumina的测序技术。
为了满足日益突出的科研需求，第三代测序技术（单分子实时DNA测序技术，测序过程无需进行PCR扩增）也问世了：主要为单分子荧光测序（SMRT）和纳米孔测序（纳米孔单分子）。
单分子荧光测序：一种依赖于DNA聚合酶的边合成边测序的技术方法，读长可达100000 bp；
纳米孔测序：一种依赖于核酸外切酶的电信号测序的技术方法，具有无限的读长。
目前由于成本较高，单读长的错误率偏高，生信分析软件不够丰富，数据积累少等原因，还没有得到广泛的运用。
高通量测序技术的应用
转录组测序（RNA-Seq）：研究细胞表现和功能；
甲基化测序：表观遗传学标记信息；
外显子组测序（Exome-Seq）：研究定向富集的DNA；
染色质免疫沉淀-深度测序（ChIP-seq）；
基因组测序；
数字基因表达谱分析；
序列捕获（Sequence Capture）技术：结合了芯片和深度测序, 利用芯片探针捕获待测片段, 再用深度测序技术分析核酸序列。
（以上内容和图片部分来自网络）
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