如何使菌体DNA更容易释放出来？

操作步骤：

1.请自行准备：无水乙醇、异丙醇、PBS 及 1.5mL 离心管。

2.取出洗涤液，按终浓度 70%比例加入无水乙醇，如 7.8mL 加入 18.2mL 无水乙醇，充分混匀。

3.菌体处理：将收集的细菌或真菌 5,000 rpm 离心 3 分钟，弃上清，加入 200μLPBS，振荡混匀，5,000 rpm 离心 3 分钟，彻底弃上清。

4.加入 100μL 裂解液Ⅰ，强烈 Vortex，直到沉淀完全悬浮，无明显块状沉淀，再加入裂解酶 10μL，充分混匀，室温放置 20 分钟。

5.加入 200 μL 裂解液Ⅱ，20μL 复合消化液，充分混匀，65℃孵育 20 分钟。

6.加入 450μL 异丙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响 DNA 的提取与后续实验。

7.将吸附柱放入收集管内，将上述溶液全部转入吸附柱内，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

8.将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液至吸附柱内，静置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

9.将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。同时，按每份样本 40μL 取洗脱液（如 10 份提取样本，即取 400μL 洗脱液），放置于灭菌 1.5mL 离心管，65℃预热。

10. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心 2 分钟，离去残留的洗涤液。

11. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 离心管内，加入上述预热的 40 μL 洗脱液，静置 2 分钟，12,000 rpm 离心 2 分钟，收集 DNA 溶液。提取的 DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

2. 洗涤液最好现用现配，按需计算用量后配制。加入乙醇后的洗涤液如使用不完，2-8℃密封保存不超过 1 周。

3. 细菌量建议不高于 10^7。