如何大幅提升尿液 RNA 的提取效率

操作步骤

1. 请自行准备：生理盐水、无水乙醇、10mL 无 RNA 酶离心管、1.5mL 无 RNA 酶离心管。

2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：

a) 析出液：4.5mL 加入 25.5mL 无水乙醇；9mL 加入 51mL 无水乙醇。

b) 洗涤液：9mL 加入 21mL 无水乙醇；18mL 加入 42mL 无水乙醇。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在 37℃溶解，摇匀后使用。

3. 取尿液 5mL(尿液的取用量可在 1-5mL 范围内)置于 10mL 无 RNA 酶离心管中，5000 rpm 离心 5 分钟，小心弃上清。加入 0.1mL 生理盐水，振荡混匀，将此悬液转移入 1.5ml 离心管中。

4. 加入 200μL 裂解液、3μL RNAConc.和 20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴 10 分钟。

5. 加入 500μL 析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响 RNA 的提取与后续实验。

6. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心 1 min，弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液至吸附柱内，静置 2 min，12,000 rpm 4℃离心 1 min，弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心 2 min，离去残留的洗涤液。在此期间，按每份样本 40μL 取洗脱液（如 10 份提取样本，即取 400μL 洗脱液），放置于灭菌 1.5mL 无 RNA 酶离心管，56℃预热 2 分钟。

9. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 无 RNA 酶离心管内，加入 40 μL 预热的洗脱液，静置 2min，12,000 rpm 4℃ 离心 2 min，收集 RNA 溶液。提取的 RNA 即可用于下一步实验或-70℃保存。

注意事项：

1.析出液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

2.裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于 37℃水浴中溶解即可。

3.为防 RNA 酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无 RNA 酶的容器和无 RNA 酶的超纯水。

4.提取的 RNA 如暂不使用，应-70℃保存，可适当加入 RNA 保护因子（货号：51090，一般 40μLRNA 溶液加入 2μL） 。