体视荧光显微镜操作教程

一、体视荧光显微镜使用方法：

将材料片放在载物台上。

开启荧光显微镜稳压器，然后按下启动组点燃紫外灯15min内不得关闭，关闭后3min内不得再启动。

将激发滤光片转至v，分色片调到v，选用495或475nm阻挡滤光片。

选用uvFL40、uvFL100荧光接物镜镜检。

在玻片上加无荧光油，先用40x，再用100x调焦镜检，呈现荧光。

因荧光物质受紫外光照射时随时间的增长荧光逐渐变弱，因此镜检时应经常变换视野。

亦可用uvFL10或uvFL20低倍镜镜检材料（用低倍镜时不加无荧光油）。

二、记录荧光图像：

荧光显微镜所看到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察。作为一般定性观察，基本上可靠的。随着技术科学的发展，在不同程度上采用客观指标记录判断结果，如用细胞分光光度计、图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果，也必须结合主观的判断。

荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要，由于荧光很易褪色减弱，要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。只是需要采用高速感光胶片如ASA200以上或24o以上。因紫外光对荧光猝灭作用大，如FITC的标记物，在紫外光下照射30s，荧光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。

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