FLP-FRT系统--诱导性基因编辑inducible gene editing

仍然还是那句话,如果想要快速学习一门新的技术,了解知识背景,看中文文章更好,如果有硕博士毕业论文那则是最佳。
说到基因编辑技术,我一开始只知道
(A)CRISPR/Cas9 https://www.jianshu.com/p/b9d2a7203e6c
在经过一系列挣扎之后,好不容易看懂了CRISPR/Cas9的原理,冷不丁冒出来一个(B)Cre/LoxP条件性敲除系统https://www.jianshu.com/p/ccae8b289cab,到今天,发现还有一个(C)FLP/FRT重组系统。

果然学习就跟人生一样,并不是我猜中了开头,没料到结尾,其实是开头也没猜对,过程更加意外,结尾至今还没看到。

1. 背景

参考资料
https://zhuanlan.zhihu.com/p/29141696
http://c.biomart.cn/bioraylab/node/314
先复习一下CRISPR中的知识点。

FLP-FRT系统--诱导性基因编辑inducible gene editing_第1张图片
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DNA双链断裂后,主要通过易错性的非同源末端连接(Non -homologous end joining, NHEJ)以及高保真性的同源重组(homologous recombination HR)进行修复,最终会造成基因敲入(knock in)、敲除(knock out)、缺失(deletion)及基因修饰(gene modification)这几种类型。
FLP-FRT系统--诱导性基因编辑inducible gene editing_第2张图片
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同源重组(百度百科):是指发生在非[姐妹染色单体(sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。看图好了

FLP-FRT系统--诱导性基因编辑inducible gene editing_第3张图片

非同源末端连接:是一种修复双股DNA断裂的方法。之所以是非同源性,是因为断裂的两段是被直接接上,而非使用了一个同源的模板。与之对比的同源性重组则需要一个同源序列来引导修复。“非同源性末端接合”这个词是由Moore和Haber于1996年首创。

位点特异性重组:既然叫点,则是小范围内的重组。

2. 什么是FLP/FRT

位点特异性重组(site-specific recombination)技术是近 20 年来发展起来的一项重要的分子生物学技术,该系统主要是通过借助能够识别特异性位点的重组酶(site-specific recombinase,SSR),在基因组上对外源 DNA 进行操作,可以实现基因的置换、倒置和删除等。FLP/FRT 系统就属于位点特异性重组系统的一种。

FLP是一个重组酶(flippase,Flp),类似于Cre,它识别的位点是FRT,当FRT在同一条DNA上且方向相同时,则两FRT位点之间的基因则被删除;FRT方向相反,则基因被倒转。
FRT:short flippase recognition target (FRT)

参考文献:
肖雪宾. FLP 重组酶表达载体的构建及其在 FLP/FRT 系统中的应用[D]. 吉林大学, 2012.

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