常用buffer

PBS溶液

称取8 g NaCl，0.2 g KCl，1.42 g Na2HPO4，0.27 g KH2PO4于1000 mL 烧杯中，加入800 mL超纯水，搅拌至粉末完全溶解，调节pH至7.2-7.4，用超纯水定容到1L，高温高压灭菌。

柠檬酸缓冲液

柠檬酸三钠3 g，柠檬酸0.4 g，加水至900 mL，充分溶解后调pH至5.96，定容至 1 L备用。

4% 多聚甲醛

称取40 g甲醛粉末于1000 mL烧杯中，添加800 mL PBS，置于磁力搅拌器(50℃)上搅拌促溶，至完全溶解后定容至1 L备用。

30% 丙烯酰胺

分别称取 N, N’-甲叉双丙烯酰胺1 g，丙烯酰胺29 g于500 mL烧杯中，加入80 mL超纯水溶解，搅拌后定容至100 mL，4℃棕色瓶保存。

1 M Tris-HCl

称取12.11 g Tris于500 mL烧杯中，加入80 mL超纯水溶解，浓盐酸调节pH至6.8，定容至100 mL，4℃保存。

1.5 M Tris-HCl

称取36.33 g Tris于500 mL烧杯中，加入800 mL超纯水溶解，浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100 mL，4℃保存。

10% SDS(W/V)

称取10 g SDS于200 mL烧杯中，90 mL超纯水完全溶解后，定容至100 mL。

10%过硫酸铵(AP)

称取1 g AP于50 mL离心管中，加入超纯水溶解后定容至10 mL。

6×SDS-PAGE加样缓冲液：

1mol/L Tris缓冲液， 3 mL； 二硫苏糖醇， 0.926 g； SDS，1.2 g， 溴酚蓝，60 mg； 甘油，6 mL
SDS 1.2 g

5×SDS-PAGE电泳缓冲液

称取Tris 15.1 g，Glycine 94 g，SDS 5.0 g于1000 mL烧杯中，加入800 mL超纯水溶解，定容至1 L。

膜转移缓冲液

分别称取Tris 3.03 g, Glycine14.4 g于1000 mL 烧杯中，加600 mL超纯水溶解，加入200 mL甲醇，定容至1 L，4 ℃保存预冷备用。

TBST

称取8 g NaCl，0.2 g KCl和3 g Tris-base于1000 mL 烧杯中，加入800 mL超纯水，充分搅拌溶解，用HCl调节pH至7.4，加入0.5 mL Tween 20充分混匀，定容至1 L。

Western Blot封闭液

称取5 g BSA溶解于80 mL TBST中，充分搅拌溶解，定容至100 mL，4 ℃保存。

LB液体培养基

准确称取10 g胰蛋白胨，5 g酵母提取物，10 g NaCl至800 mL超纯水中，置于磁力搅拌器搅拌至完全溶解，定容至1 L，高压灭菌锅121℃高压灭菌备用

LB固体培养基

准确称取10 g胰蛋白胨，5 g酵母提取物，10 gNaCl至800 mL超纯水中，置于磁力搅拌器搅拌至完全溶解，定容至1 L，加入1.5%的琼脂粉，高压灭菌锅121℃高压灭菌备用

50×TAE Buffer配制：

称量 配制：称量 Tris Base 242 g，Na2EDTA·2H2O 37.2 g于 1 L烧杯中；向加入约 烧杯中；向加入约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解；加入 57.1 ml的冰醋酸，充分搅拌调节溶液 的冰醋酸，充分搅拌调节溶液 的冰醋酸，充分搅拌调节溶液 pH至 8.5；加去离子水将溶液定容至 ；加去离子水将溶液定容至 1 L，充分 ，充分 混匀，室温保存。

10×TBE Buffer配制：

称量 配制：称量 Tris Base 108 g，Na2EDTA·2H2O 7.44 g于 1 L烧杯中；向加入约 烧杯中；向加入约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解；加入 的去离子水，充分搅拌溶解；加入 55 g的 硼酸，充分搅拌加去离子水将溶液定容至 1 L，充分混匀，室温保存。 ，

PBS缓冲液 (1L)

配方：
①称取下列试剂，置于 1L烧杯中。
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42g
KH2PO4 0.27g
②向烧杯中加入约 800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 的去离子水，充分搅拌溶解。
③滴加浓盐酸将 PH调至 7.4，然后加入去离子水溶液定容至 1L。
④高温压（ 121℃、30min）

考马斯亮蓝染色脱液 (2L)

配方： ①量取下 列溶液，置于 2L的瓶子中。
冰醋酸 200mL
乙醇 100mL
dH2O 1700mL
②充

10X膜转移缓冲液 (2L)

配方： ①称量下列试剂，置于烧杯中。
Glycine 58g
Tris 116g
SDS 7.4g
②加入去离子水，充分搅拌溶解后转移至 2L的瓶子，并定容至 的瓶子，并定容至 2L。
③要用的时候量取 100mL 10X转膜缓冲液和 转膜缓冲液和 200mL甲醇，加去离子 甲醇，加去离子 甲醇，加去离子 水定容至 1L。
④混匀后，放于 4℃冰箱冷却 ，现配用 。

TBST buffer (1L)

配方： ①称取下列试剂，置于 1L的蓝口瓶。
NaCl 8.8g
1M Tris-HCl(PH=8.0) 20mL
②向烧杯中加入约 800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 的去离子水，充分搅拌溶解。
③加入 0.5mL Tween20后充分混匀。
④加去离子水将溶液定容至 1L，4℃保存。
0.25% Trypsin-0.02%EDTA（100 mL）
称量 0.25 g Trypsin1:250和 0.02 g EDTA于 200 mL烧杯中 ，加入 100 mL预 冷的 PBS缓冲液 ，冰浴 并在磁力搅拌器上，充分溶解。
待充分溶解后 ，0.22 μm针头滤器 过滤除菌并分装成 5 mL一管 ，-20 ℃长 期保存 。
细菌培养基

LB液体培养基（ 100mL）

配方 :①称取下列试剂，置于洗净的锥形瓶中。
Tryptone 1g
Yeast Extract 0.5g
NaCl 0.5g
②加去 80ml离子水，充分搅拌溶解。
③待全部溶解后，加去离子水将培养基定容至 100mL。
④用纱布和报纸以及棉线封口。
⑤高温压灭菌，度为 121℃，时间为 30min。
⑥4℃保存。

LB固体培养基 ( 100mL)

配方 :①称取下列试剂，置于洗净的锥形瓶中。
Tryptone 1g
Yeast Extract 0.5g
NaCl 0.5g
琼脂 1.5g
②加去 80ml离子水，充分搅拌溶解。
③待全部溶解后，加去离子水将培养基定容至 100mL。
④用纱布和报纸以及棉线封口。
⑤高温压灭菌，度为 121℃，时间为 30min。

⑥待温度降至手可握住的时，加入 Amp，混匀后倒 开始倒 平板 ， 室温冷却凝固后， 用封口膜住培养皿开4℃短

氨苄青霉素贮存溶液

氨苄青霉素贮存溶液 (10mL) (100mg/mL)
配方：
①称取氨苄青霉素 1g于无菌的 15ml离心管。 离心管。
②在超净工作台里，用 无菌 水溶解，然后定容到 10mL。
③定容后 ，通过 0.22μm滤器过除菌 滤器过除菌 。
④将配好的溶液分装成小管，然后储存在 -20℃里