艾美捷FLIVO探针活体凋亡检测解决方案

关于细胞凋亡的检测工具，市面上屡见不鲜，但是大部分都是针对体外（in vitro）细胞的，活体(in vivo)细胞的凋亡检测却不多见。艾美捷ImmunoChemistry（ICT）FLIVO探针，能够用于细胞凋亡活体检测，助力科研。

FLIVO(FLuorescence in vIVO)探针是细胞渗透性、无毒性的天冬氨酸蛋白酶(Caspases)荧光抑制剂，含有缬氨酸－丙氨酸－天冬氨酸(VAD)氨基酸序列，该序列是活性Caspase的靶点,夹在荧光标记和氟甲基酮(FMK)之间。静脉注射后，FLIVO通过体循环，在细胞中不断扩散。如果细胞内存在活性Caspase，FLIVO将与Caspase上的半胱氨酸形成不可逆的共价键。因此只要细胞膜完好，结合的FLIVO探针就会留在细胞内，从而被标记上荧光，未结合的FLIVO则在动物的体循环中被清除，动物体内剩下的信号就是对caspase活性的直接测定。所以FLIVO可以用于检测活体动物体内Caspase介导的细胞凋亡、焦亡。FLIVO非常敏感，自然发生的低水平细胞凋亡也会被检测到。  

艾美捷ICT FLIVO探针活体凋亡检测包含的FLIVO探针由荧光基团、VAD序列和氟甲基酮(FMK)组成夹心结构，荧光基团用来检测荧光，VAD序列是活性caspase靶点，FMK有助于与活性caspase形成共价键。  

图1：利用FAM-FLIVO监测细胞死亡，健康神经元和凋亡神经元之间有明显的区别。在对糖尿病的活体动物大脑研究中，对照大鼠(左)和8周STZ糖尿病大鼠(右)的caspase活性来评估神经退行性变。在大鼠死亡前30分钟静脉注射FAM-FLIVO(#981)，直接标记caspase阳性凋亡神经元。死亡后，制备20um冰冻切片的导水管周围灰质(PAG)，用红色荧光Nissl反染色，以识别所有神经元。濒死的凋亡神经元(左)显示FAM-FLIVO(黄/绿色)和Nissl(红色)双重染色。在该模型中，糖尿病动物导水管周围灰质中caspase活性水平高于对照组动物。 

图2：在小鼠脑内接种活金黄色葡萄球菌后诱发脑脓肿。动物在感染后17小时静脉注射NIR-FLIVO 690示踪剂(#9112)或NIR-FLIVO 690游离染料对照剂(#9113)，然后在1小时后使用IVIS Spectrum从离体大脑组织中获得信号。在注射NIR-FLIVO 690示踪剂(右图)后，强烈的caspase活性与脑脓肿相关，而在注射NIR-FLIVO 690游离染料对照剂(左图)的动物中检测到极少的信号。

图3：使用CRi Maestro成像系统，使用NIR-FLIVO 747示踪剂(#9114)对小鼠肿瘤模型中的凋亡组织进行体内成像。NIR-FLIVO 747示踪剂用于无创监测一种实验性抗癌治疗的疗效和时间动力学。在接受安慰剂或实验治疗后，阴性对照小鼠(左图)和实验治疗小鼠(右图)静脉注射NIR-FLIVO 747示踪剂，并在不同时间点使用CRi Maestro成像系统进行无创成像。实验组被试的凋亡肿瘤组织呈亮蓝色荧光，表明实验治疗有凋亡效应。