NIPT（无创产前DNA检测）技术的解说及运用（五）

      这期给大家介绍一下NIPT检测技术。NIPT为Non Invasive Prenatal Testing的英文首字母缩写（以下简称“NIPT”），NIPT称为无创产前DNA检测又称为无创胎儿染色体非整倍体检测等。NIPT检测技术仅需采取孕妇静脉血，利用二代DNA测序技术对母体外周血浆中纯化后的游离胎儿DNA片段（cffDNA）进行测序，并将测序结果进行数据化处理、生物信息分析，可以从中解读出胎儿的遗传信息，从而检测胎儿是否患三大染色体疾病。

    下面简单介绍一下NIPT检测技术实验流程：NIPT检测样本的采集、NIPT检测样本的接收和保存、NIPT检测样本DNA的提取和纯化、构建文库和纯化、制备Pooling文库和上机、测序、数据分析和处理、出具检测报告。

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1、NIPT检测样本的采集   

首先孕妇们到采血室采外周血（5ml—10ml）后，血液样本会直接送到高通量测序实验室。部分医院没有资质做相关检查，样本就会往上或合作单位继续送检。NIPT检测采血管需专用的采血管，由于有的地方血液样本不能做到及时送检，所以对采血管的要求更高。目前常用的有美国公司Streck自主研发生产的Streck  Cell-Free DNA BCT采血管和美国Ardent BioMed公司研制设计Ardent Cell-Free DNA BCT采血管等。采集完血液样本后，需要在指定温度范围保存、运输。

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2、NIPT检测样本的接收和保存

        实验室接收血液样本第一时间需要检查样本状态（温度是否合格、血液样本是否凝血等）、采血时间，采血量等。检查完不合格样本及时通知对接人员或孕妇进行重新采集样本，合格样本继续处理：低温低速离心。离心完成后根据血浆颜色判断血液样本是否溶血，溶血、严重溶血依旧属于不合格样本需通知重采血处理。合格样本则分离出血浆、白细胞（部分实验室需要保持）保存。短期可-20度保存，长期则需要-80度保存。保存期为3年到5年不等。

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3、NIPT检测样本DNA的提取和纯化、构建文库和纯化

      将适量血浆常温融化，提取血浆中游离的DNA片段进行纯化，现在普遍使用的是操作简单、耗时较短的磁珠法。磁珠充分吸附游离DNA片段，清洗掉蛋白质和其他杂质后洗脱出吸附在磁珠上的游离DNA片段，收集备用。 将收集到的DNA片段进行PCR扩增、添加生物识别标签和文库纯化，最后检验文库样本是否合格和浓度大小。

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4、制备Pooling文库和上机

      将合格的文库样本，按一定的比例混合在一起，制备成混合Pooling文库。由于各家测序平台不同，上机处理方式也有所不同，后期会详细给大家讲解目前市场上较为常用的测序平台、数据分析处理和出具检测报告。

    不论什么测序平台，目前NIPT检测技术，都是存在一些局限性。NIPT检测技术仅用于染色体疾病的辅助诊断，不能作为染色体疾病诊断的唯一依据，应该综合患者临床的其他指征及其它检测结果一起进行诊断。

        以上内容仅供大家参考，欢迎感兴趣的朋友一起来补充、探讨。